Perbedaan yang menonjol antara Southern Northern dan Western blotting adalah Southern blotting melibatkan identifikasi DNA , dan Northern blotting melibatkan identifikasi RNA , sedangkan Western blotting melibatkan identifikasi protein.
Selatan, Utara, dan Barat adalah tiga teknik blotting yang digunakan untuk mendeteksi molekul DNA, RNA, atau protein tertentu dalam sampel. Selama blotting, makromolekul ditransfer ke membran dari gel dan dibuat untuk mengikat dengan asam nukleat atau antibodi spesifik yang membantu dalam deteksi.
Area utama Tercakup
- Apa itu Southern Blotting – Definisi, Proses, Aplikasi 2. Apa Itu Northern Blotting – Definisi, Proses, Aplikasi 3. Apa Itu Western Blotting – Definisi, Proses, Aplikasi 4. Apa Persamaan Antara Southern Northern dan Western Blotting – Garis Besar Karakteristik Umum 5. Apa Perbedaan Antara Southern Northern dan Western Blotting – Perbandingan Perbedaan Utama
Istilah Utama
Antibodi, DNA, Elektroforesis, Northern Blotting, RNA, Protein, Southern Blotting, Western Blotting
Yang perlu anda ketahui tentang Southern Blotting?
Southern blotting adalah teknik yang digunakan untuk mendeteksi urutan DNA tertentu dalam campuran DNA. Langkah-langkah dasar dari Southern blot adalah sebagai berikut.
Elektroforesis – Ini memisahkan sampel DNA menjadi pita yang berbeda berdasarkan ukuran dengan elektroforesis gel .
Transfer – Selama transfer, membran nitroselulosa ditempatkan dalam kontak dengan gel dan pita DNA bergerak ke membran melalui aksi kapiler.
Deteksi Urutan Spesifik – Urutan target pada membran dihibridisasi dengan urutan oligonukleotida spesifik berlabel yang disebut probe hibridisasi. Probe hibridisasi pendek, berukuran 100-500 bp, molekul DNA beruntai tunggal. Keketatan, yang tergantung pada suhu dan konsentrasi garam dari buffer hibridisasi, mempengaruhi hibridisasi. Ketegangan tinggi ditentukan oleh suhu tinggi dan konsentrasi garam rendah meningkatkan spesifisitas hibridisasi sementara keketatan rendah ditentukan oleh suhu rendah dan konsentrasi garam tinggi menurunkan spesifisitas.
Gambar 1: Blotting Selatan
Tujuan utama dari Southern blotting adalah untuk mendeteksi urutan DNA tertentu dalam sampel. Teknik ini digunakan dalam sidik jari DNA, tes paternitas, identifikasi korban, dan identifikasi kriminal. Ini juga membantu dalam identifikasi gen tertentu, dalam RFLP (polimorfisme panjang fragmen pembatasan), mutasi dan identifikasi penataan ulang gen, penyakit genetik dan agen infeksi.
Yang perlu anda ketahui tentang Blotting Utara?
Northern blotting adalah teknik yang digunakan untuk mendeteksi RNA tertentu dalam campuran RNA. Langkah-langkah dasar dari Northern Blot adalah sebagai berikut.
Elektroforesis – Ini memisahkan sampel RNA sesuai dengan ukurannya menjadi pita yang berbeda.
Transfer – Dengan aksi kapiler, pita RNA dalam gel ditransfer ke membran.
Deteksi urutan spesifik – Urutan RNA target dideteksi dengan hibridisasi dengan probe oligonukleotida berlabel yang terdiri dari DNA.
Gambar 2: Blotting Utara
Karena Northern blotting dapat mengidentifikasi urutan RNA spesifik dalam sampel, itu dapat digunakan dalam studi ekspresi gen. Ini juga dapat membantu dalam diagnosis penyakit.
Yang perlu anda ketahui tentang Western Blotting?
Western blot adalah teknik blotting yang digunakan untuk mendeteksi urutan asam amino tertentu dalam campuran protein. Langkah-langkah dasar Western Blot adalah sebagai berikut.
Elektroforesis – Protein individu dipisahkan berdasarkan ukuran menjadi pita oleh SDS PAGE .
Transfer – Pita protein dalam gel dipindahkan ke membran dengan cara blotting.
Deteksi Protein Spesifik – Membran dengan protein terpisah diinkubasi dengan antibodi primer yang hanya mengikat protein spesifik. Antibodi sekunder, yang diberi label dengan enzim seperti horseradish peroxidase (HRP) atau alkaline phosphatase, digunakan untuk mendeteksi antibodi primer. Ketika diinkubasi dengan substrat, aksi enzim memvisualisasikan pengikatan antibodi ke wilayah tertentu pada membran.
Gambar 3: Western Blotting
Western blotting juga disebut protein blot atau immunoblotting. Ini dapat mengidentifikasi jumlah protein dalam sampel, keberadaan bakteri dan virus dalam serum, dan adanya antibodi HIV dalam serum. Itu juga dapat mendeteksi protein yang rusak. Selain itu, western blotting adalah tes definitif untuk Hepatitis B, penyakit Creutzfeldt-Jacob, penyakit Lyme, dan Herpes.
Persamaan Antara Southern Northern dan Western Blotting
- Southern blotting, Northern blotting, dan Western blotting adalah tiga teknik blotting yang digunakan untuk mengidentifikasi jenis makromolekul tertentu dalam sampel.
- Tiga langkah teknik blotting adalah elektroforesis, transfer, dan deteksi.
- Setiap teknik membutuhkan denaturasi dan pemblokiran dengan kelebihan makromolekul yang sesuai.
- Setiap teknik memiliki aplikasi dalam bioteknologi dan kedokteran.
Perbedaan Antara Blotting Utara dan Barat Selatan
Definisi
Southern blotting adalah istilah untuk prosedur untuk mengidentifikasi urutan DNA tertentu, sedangkan Northern blotting adalah istilah untuk adaptasi prosedur Southern blot yang digunakan untuk mendeteksi urutan RNA tertentu dengan hibridisasi dengan DNA komplementer dan Western blotting adalah istilah untuk prosedur blotting yang digunakan untuk mengidentifikasi amino spesifik. urutan asam dalam protein.
Dikembangkan oleh
Southern blotting dikembangkan oleh Edward M. Southern pada tahun 1975. Northern blotting dikembangkan oleh Alwine dan rekan-rekannya pada tahun 1979, dan Western blotting dikembangkan oleh kelompok George Stark di Stanford University pada tahun 1979.
Molekul Terdeteksi
Southern blotting mendeteksi sekuens DNA spesifik, Northern blotting mendeteksi sekuens RNA spesifik, sedangkan Western blotting mendeteksi protein spesifik.
Elektroforesis Gel
Southern blotting melibatkan elektroforesis gel Agarose, dan Northern blotting melibatkan denaturasi gel agarose formaldehida sedangkan Western blotting melibatkan SDS PAGE.
Metode Blotting
Baik Southern dan Northern Blotting melibatkan transfer kapiler sementara Western blotting melibatkan transfer listrik.
Probe
Southern blotting menggunakan probe DNA sedangkan Northern blotting menggunakan probe cDNA dan Western blotting menggunakan antibodi primer dan sekunder.
Aplikasi
Southern blotting digunakan untuk mengidentifikasi sekuens gen tertentu dan dalam sidik jari DNA. Northern blotting digunakan dalam analisis ekspresi gen, dan Western blotting digunakan dalam diagnosis penyakit.
Kata terakhir
Southern blotting mengidentifikasi urutan DNA spesifik, sedangkan Northern blotting mengidentifikasi urutan RNA spesifik dan Western blotting mengidentifikasi urutan protein spesifik dalam sampel. Maka dari itu, Perbedaan yang menonjol antara ketiga teknik blotting adalah jenis makromolekul yang mereka deteksi.
Sumber bacaan:
- “Southern Blotting: Prinsip, Prosedur dan Aplikasi -.” CATATAN BIOLOGI ONLINE, 4 Des 2017, Tersedia Disini 2. Kochunni, Deena T, dan Jazir Haneef. “Northern Blotting: Prinsip, Prosedur dan Aplikasi.” Ujian Biologi 4 U , Tersedia Disini 3. “Teknik Western Blotting: Prinsip, Prosedur dan Aplikasi -.” CATATAN ONLINE BIOLOGI, 4 Des 2017, Tersedia Disini
Sumber gambar:
- “Gambar 17 01 05” Oleh CNX OpenStax – ( CC BY 4.0 ) melalui Commons Wikimedia 2. “Diagram blot utara” Oleh Ilewieszoośmiornicach – Karya sendiri ( CC BY-SA 4.0 ) melalui Commons Wikimedia 3. “Western Blotting” Oleh Cawang – Karya sendiri ( CC0 ) melalui Commons Wikimedia
