Perbedaan yang menonjol antara GFP dan EGFP adalah GFP (singkatan dari Green Fluorescent Protein) adalah protein yang menunjukkan fluoresensi hijau terang ketika terkena cahaya biru sedangkan EGFP (singkatan dari Enhanced Green Fluorescence Protein) menunjukkan fluoresensi yang lebih kuat daripada GFP. Lebih jauh, satu perbedaan penting lainnya antara GFP dan EGFP adalah GFP adalah protein tipe liar yang diisolasi dari ubur-ubur, Aequorea victoria . Tapi, EGFP adalah varian rekayasa dari tipe liar asli.
GFP dan EGFP adalah dua jenis protein yang berfungsi sebagai kromofor internal. Mereka tidak memerlukan enzim aksesori s/substrat, kofaktor atau produk gen untuk menunjukkan warnanya. Maka dari itu, keduanya digunakan sebagai reporter ekspresi gen dalam biologi molekuler.
Topik bahasan kami tentang:
- Apa itu GFP – Definisi, Struktur, Kepentingan 2. Apa itu EGFP – Definisi, Struktur, Kepentingan 3. Apa Persamaan Antara GFP dan EGFP – Garis Besar Karakteristik Umum 4. Apa Perbedaan Antara GFP dan EGFP – Perbandingan Perbedaan Kunci
Istilah Utama
Kromofor, EGFP, GFP, Fluoresensi Hijau, Protein Tipe Liar
Yang perlu anda ketahui tentang GFP?
GFP (green fluorescent protein) adalah protein yang bersinar hijau di bawah sinar biru atau UV. Ini secara alami terjadi pada ubur-ubur, Aequorea Victoria . GFP terdiri dari 238 asam amino. Ukuran GFP adalah 26,9 kDa. GFP adalah alat yang ampuh dalam biologi molekuler karena fluoresensi intrinsiknya tanpa molekul aksesori apa pun. Fluoresensi adalah karena penataan ulang kovalen asam amino yang berdekatan dari protein. Setelah pelipatan protein, atom rantai utama, Ser65, Tyr66 dan Gly67 membentuk kromofor p – hydroxybenzylideneimidazolinone planar yang sangat terkonjugasi dengan adanya O2 . Studi struktur kristal mengungkapkan bahwa pengemasan kromofor dalam inti struktur -barrel molekul melindunginya dari pendinginan melalui oksigen paramagnetik, dipol air atau isomerisasi cis-trans. Selain itu, interaksi non-kovalen kromofor dengan molekul tetangga meningkatkan sifat spektralnya.
Gambar 1: Representasi Pita GFP dan Fluorofor
GFP dapat dimasukkan ke dalam organisme selama modifikasi transgenik . Hal ini juga dapat dipertahankan dari generasi ke generasi. Kelemahan utama GFP tipe liar adalah berkurangnya efektivitas protein dalam pencitraan sel yang disebabkan oleh pelipatan efisiensi rendah pada suhu fisiologis seperti 37 ° C, menjatuhkan sinyal fluoresen. Juga, tingkat pematangan GFP di dalam sel inang lambat sementara cenderung berkumpul. Dua puncak eksitasi dapat diamati karena adanya dua bentuk kromofor yang berbeda. Namun, rekayasa protein telah memecahkan sebagian besar masalah dengan memperkenalkan bentuk varian GFP tipe liar.
Yang perlu anda ketahui tentang EGFP?
EGFP (enhanced green fluorescence protein) adalah varian dari GFP tipe liar dengan emisi intensitas tinggi sehubungan dengan GFP. Ini adalah salah satu varian GFP pertama dan terpenting. Dua mutasi, F64L dan S65T, menghasilkan EGFP dengan efisiensi lipat yang lebih besar pada 37 °C. Menariknya, EGFP memiliki puncak eksitasi tunggal pada ~490 nm karena penekanan puncak 395 nm oleh S65T karena memodulasi keadaan terionisasi Glu222 di dekatnya. Di sisi lain, F64L meningkatkan efisiensi pelipatan pada 37 °C. Yang penting, urutan kodon EGFP dioptimalkan untuk ekspresi dalam sel mamalia.
Gambar 2: Ekspresi EGFP
Persamaan Antara GFP dan EGFP
- GFP dan EGFP adalah protein yang menunjukkan fluoresensi hijau terang saat terkena cahaya biru.
- Keduanya dapat berfungsi sebagai kromofor internal tanpa enzim/substrat aksesori, kofaktor, atau produk gen untuk menunjukkan warnanya.
- Mereka membentuk lipatan -barrel klasik dengan kromofor, mengandung heliks yang mengalir melalui inti struktur.
- Mereka digunakan sebagai reporter ekspresi dalam biologi molekuler.
Perbedaan Antara GFP dan EGFP
Definisi
GFP: Protein tipe liar yang menunjukkan fluoresensi hijau di bawah sinar biru atau UV dan secara alami terdapat pada ubur-ubur, Aequorea Victoria
EGFP: Varian dari GFP tipe liar dengan emisi intensitas tinggi sehubungan dengan GFP
Berdiri untuk
GFP: Protein Fluoresensi Hijau
EGFP: Protein fluoresensi hijau yang ditingkatkan
Asal
GFP: Tipe liar
EGFP: Mutan
Asam Amino ke- 64
GFP: Fenilalanin
EGFP: Leusin
Asam Amino ke- 65
GFP: Serin
EGFP: Treonina
Kecerahan Warna
GFP: Hijau terang
EGFP: Hijau lebih cerah
Puncak Eksitasi
GFP: Dua puncak (395 nm dan 490 nm)
EGFP: Puncak tunggal (490 nm)
Efisiensi Lipat pada 37 °C
GFP: Rendah
EGFP: Tinggi
Kata terakhir
GFP adalah protein tipe liar yang menunjukkan fluoresensi hijau terang saat terkena sinar biru atau UV. EGFP adalah varian GFP yang menunjukkan fluoresensi intensitas tinggi jika dibandingkan dengan GFP. Dengan demikian, Perbedaan yang menonjol antara GFP dan EGFP adalah intensitas fluoresensi hijau yang dipancarkan setiap protein.
Sumber bacaan:
- Arpino, James AJ, dkk. “Struktur Kristal Protein Fluorescent Hijau yang Ditingkatkan menjadi 1,35 Resolusi Mengungkapkan Konformasi Alternatif untuk Glu222.” PLOS Kedokteran , Perpustakaan Umum Ilmu Pengetahuan, journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0047132.
Sumber gambar:
- “Gfp and fluorophore” Oleh Raymond Keller (Raymond Keller (bicara)), di bawah naungan Crystal Protein. – Karya sendiri ( Domain Publik ) melalui Commons Wikimedia 2. “Fgams ppat egfp puncta” Oleh Zhao A, Tsechansky M, Swaminathan J, Cook L, Ellington AD, dkk. (2013) Enzim Biosintetik Purin yang Ditransfusikan Secara Transien Membentuk Badan Stres . PLoS ONE 8(2): e56203. doi:10.1371/journal.pone.0056203 ( CC BY 3.0 ) melalui Commons Wikimedia
