Perbedaan yang menonjol antara kromatografi fase normal dan fase balik adalah kromatografi fase normal memiliki fase diam yang sangat polar dan fase gerak non-polar sedangkan kromatografi fase balik memiliki fase diam non-polar dan fase gerak polar. Selanjutnya, fase diam dari kromatografi fase normal terutama silika murni, dan fase gerak adalah pelarut tidak berair seperti kloroform sedangkan fase diam dari kromatografi fase balik adalah substrat silika yang dimodifikasi dengan rantai panjang hidrofobik panjang dan fase gerak. fase terutama air, metanol atau asetonitril.
Kromatografi fase normal dan terbalik adalah dua jenis metode HPLC (kromatografi cair kinerja tinggi) yang beroperasi di bawah tekanan tinggi. Umumnya, mereka memiliki kekuatan resolusi yang lebih tinggi jika dibandingkan dengan kromatografi cair biasa.
Topik bahasan kami tentang:
- Apa itu Kromatografi Fase Normal – Pengertian, Proses, Kepentingan 2. Apa Itu Kromatografi Fase Terbalik – Pengertian, Proses, Kepentingan 3. Apa Persamaan Antara Kromatografi Fase Normal dan Fase Terbalik – Garis Besar Ciri-ciri Umum 4. Apa Perbedaannya Antara Kromatografi Fase Normal dan Fase Terbalik – Perbandingan Perbedaan Utama
Istilah Utama
HPLC, Kromatografi Cair, Fase Gerak, Kromatografi Fase Normal, Kromatografi Fase Terbalik, Fase Diam
Yang perlu anda ketahui tentang Kromatografi Fase Normal?
Kromatografi fase normal adalah jenis teknik HPLC. Ini memisahkan analit berdasarkan tingkat interaksi terhadap penyerap, yaitu silika polar. Maka dari itu, fase diam dari jenis kromatografi ini bersifat hidrofilik. Itu juga dapat membuat interaksi hidrofilik dengan molekul hidrofilik dalam campuran sampel. Umumnya, interaksi ini termasuk ikatan hidrogen, interaksi dipol-dipol, dll. Maka dari itu, lebih banyak analit non-polar bertahan lebih lama di fase diam, meningkatkan waktu retensi.
Gambar 1: Kromatografi Fase Normal dan Fase Terbalik – Properti
Selanjutnya, fase gerak dalam kromatografi fase normal adalah non-polar dan non-air. Maka dari itu, analit non-polar atau hidrofobik dalam campuran tercuci secara efektif dengan fase gerak pada awal proses. Sementara itu, waktu retensi analit berkurang dengan meningkatnya polaritas fase gerak. Selanjutnya, reproduktifitas yang buruk dari waktu retensi adalah kelemahan utama dari kromatografi fase normal. Pada dasarnya, hal ini terjadi karena adanya lapisan air atau pelarut organik protik pada permukaan silika. Namun, ini dihilangkan dalam kromatografi fase terbalik.
Yang perlu anda ketahui tentang Kromatografi Fase Terbalik?
Kromatografi fase terbalik adalah jenis HPLC terbaru. Ini memiliki peningkatan reproduktifitas waktu retensi bila dibandingkan dengan kromatografi fase normal. Pada dasarnya, peningkatan reproduktifitas ini dicapai dengan membuat fase diam non-polar. Untuk melakukan itu, permukaan fase diam silika dimodifikasi sebagai RMe2SiCl, di mana R adalah gugus alkil rantai lurus seperti C18H37 atau C8H17. Namun, karena sifat fase diam yang non-polar, analit yang kurang polar dalam campuran sampel cenderung memiliki waktu retensi yang lebih tinggi dibandingkan dengan kromatografi fase normal.
Gambar 2: Kromatografi Fase Terbalik – Elusi
Selain itu, seseorang dapat meningkatkan waktu retensi dengan menambahkan lebih banyak air ke fase gerak, yang, pada gilirannya, meningkatkan interaksi hidrofobik antara analit non-polar dan fase diam. Juga, fase gerak dari kromatografi fase terbalik bersifat polar, menghilangkan analit polar dalam campuran sampel. Ini memfasilitasi pemisahan analit non-polar dalam campuran sampel. Selanjutnya, tegangan permukaan fase gerak, serta pH-nya, memiliki efek pada waktu retensi.
Persamaan Antara Kromatografi Fase Normal dan Fase Terbalik
- Kromatografi fase normal dan terbalik adalah dua jenis teknik kromatografi HPLC.
- Instrumentasi skema mereka termasuk degasser, sampler, pompa, dan detektor.
- Keduanya beroperasi di bawah tekanan tinggi.
- Selain itu, dimensi kolom tipikalnya adalah diameter 2,1–4,6 mm, dan panjang 30–250 mm.
- Keduanya memisahkan sejumlah kecil sampel.
- Pemisahan didasarkan pada derajat interaksi yang berbeda dari komponen sampel dengan partikel adsorben. Interaksi ini bergantung pada suhu.
- Partikel adsorben yang lebih kecil (ukuran partikel rata-rata 2–50 m) memberikan daya resolusi tinggi untuk kedua jenis kromatografi.
- Selanjutnya, kedua jenis kromatografi memberikan analisis kuantitatif komponen sampel.
- Mereka mengambil sekitar 2-60 menit per sampel tetapi, tidak memungkinkan analisis paralel.
- Waktu retensi kromatografi dapat ditingkatkan dengan meningkatkan interaksi analit dengan kolom.
- Analit dapat dielusi dengan membuat polaritas fase gerak lebih mirip dengan polaritas fase diam.
Perbedaan Antara Kromatografi Fase Normal dan Fase Terbalik
Definisi
Kromatografi fase normal adalah istilah untuk metode pemisahan yang memungkinkan distribusi komponen campuran antara dua fase, salah satunya adalah fase diam polar sedangkan fase gerak non-polar. Sebaliknya, kromatografi fase terbalik adalah istilah untuk metode pemisahan, yang fase geraknya lebih polar daripada fase diam.
Evolusi
Kromatografi fase normal berkembang pada tahun 1970-an dalam bentuk kromatografi cair. Tapi, kromatografi fase terbalik adalah bentuk HPLC yang baru berkembang.
Fase diam
Selanjutnya, kromatografi fase normal menggunakan fase diam polar, yang terutama silika murni, sedangkan kromatografi fase terbalik menggunakan fase diam non-polar, yang merupakan substrat silika termodifikasi dengan rantai panjang hidrofobik panjang.
Fase Seluler
Kromatografi fase normal menggunakan pelarut non-polar, non-air sebagai fase gerak, yang terutama kloroform sedangkan kromatografi fase balik menggunakan fase gerak polar, yang terutama air, metanol atau asetonitril.
Jenis Pemisahan
Selain itu, kromatografi fase normal memisahkan analit polar dengan waktu retensi tinggi di kolom, sedangkan kromatografi fase terbalik memisahkan analit yang kurang polar, yang memiliki waktu retensi tinggi di kolom.
Analit dalam Fase Seluler
Pada kromatografi fase normal, fase gerak membawa analit non-polar pada awal pemisahan sedangkan pada kromatografi fase terbalik, fase gerak membawa analit polar.
Meningkatkan Waktu Retensi
Fase gerak non-polar meningkatkan waktu retensi kromatografi fase normal sedangkan fase gerak polar meningkatkan waktu retensi kromatografi fase terbalik.
Elusi
Analit dapat dielusi dengan meningkatkan polaritas fase gerak dalam kromatografi fase normal sedangkan analit dapat dielusi dengan menurunkan polaritas fase gerak dalam kromatografi fase terbalik.
Karakteristik Fase Stasioner
Fase diam dari kromatografi fase normal mengandung lapisan air atau pelarut organik protik sedangkan fase diam dari kromatografi fase balik tidak mengandung air atau lapisan pelarut protik.
Reproduksibilitas Waktu Retensi
Selain itu, kromatografi fase normal memiliki reproduktifitas waktu retensi yang buruk sedangkan kromatografi fase terbalik memiliki reproduktifitas waktu retensi yang lebih tinggi.
Kerusakan pada Kolom
Kolom kromatografi fase normal mudah rusak sedangkan kolom kromatografi fase balik sulit rusak.
Kata terakhir
Kromatografi fase normal adalah jenis HPLC yang menggunakan fase diam polar dan fase gerak non-polar. Akibatnya, analit non-polar dari campuran bergerak keluar dari kolom dengan mudah sambil memungkinkan pemisahan analit polar berdasarkan tingkat interaksi terhadap penyerap fase diam. Di sisi lain, kromatografi fase terbalik adalah jenis HPLC terbaru, yang menggunakan fase diam non-polar dan fase gerak polar. Maka dari itu, analit polar bergerak keluar dari kolom bersama dengan fase ge
rak, memungkinkan pemisahan analit non-polar berdasarkan tingkat intera
ksi dengan fase diam. Maka dari itu, Perbedaan yang menonjol antara kromatografi fase normal dan terbalik adalah jenis fase diam dan fase gerak.
Sumber bacaan:
- “Mode Pemisahan HPLC.” Perairan , Tersedia Di Sini .
Sumber gambar:
- “Kegunaan dan Manfaat HILIC” Oleh Chem461S16Group4 – Karya sendiri ( CC BY-SA 4.0 ) melalui Commons Wikimedia 2. “Skema Elusi Gradien Fase Terbalik” Oleh Nategm – Karya sendiri ( CC BY-SA 4.0 ) melalui Commons Wikimedia
