Perbedaan yang menonjol antara ELISA dan ELFA adalah, dalam ELISA, perkembangan warna adalah kriteria deteksi untuk sampel positif, tetapi dalam ELFA, memancarkan fluoresensi adalah kriteria deteksi .
ELISA dan ELFA adalah dua metode imunologi yang digunakan dalam mendeteksi protein dalam sampel biologis terutama antibodi dan antigen . Meskipun ELISA adalah metode yang sensitif, ELFA lebih sensitif daripada ELISA.
Topik bahasan kami tentang:
- Apa itu ELISA – Pengertian, Jenis, Kepentingannya 2. Apa itu ELFA – Pengertian, Metode, Kepentingannya 3. Apa Persamaan Antara ELISA dan ELFA – Garis Besar Karakteristik Umum 4. Apa Perbedaan Antara ELISA dan ELFA – Perbandingan Perbedaan Utama
Istilah Utama
Substrat Kromogenik, ELFA, ELISA, Substrat Fluorogenik, Uji Imunologi, Sensitivitas
Yang perlu anda ketahui tentang ELISA?
ELISA ( enzim-linked immunosorbent assay ) adalah jenis immunoassay enzim fase padat yang digunakan dalam mendeteksi protein spesifik dalam sampel biologis dengan bantuan pengembangan warna melalui reaksi enzimatik. Berdasarkan metodologi, ada tiga jenis utama ELISA; ELISA langsung, ELISA tidak langsung , dan ELISA sandwich.
ELISA langsung
ELISA langsung adalah metode ELISA yang pertama kali dikembangkan, yang cukup sederhana. Di sini, permukaan pelat mikrotiter (fase padat) dilapisi dengan sampel. Kemudian, antibodi terkait-enzim mengikat dengan protein spesifik di piring. Dengan penambahan substrat kromogenik, adalah mungkin untuk mendeteksi antibodi yang terikat protein.
ELISA tidak langsung
ELISA tidak langsung adalah metode ELISA yang agak kompleks, yang menggunakan proses dua langkah untuk mendeteksi protein tertentu dalam sampel. Di sini, langkah pertama adalah melapisi pelat mikrotiter dengan sampel dan menginkubasinya dengan jenis antibodi primer tertentu, yang mengikat protein yang diinginkan. Langkah selanjutnya adalah menginkubasi pelat ini dengan antibodi sekunder terkait-enzim, yang berikatan dengan antibodi primer. Kemudian, dengan penambahan substrat kromogenik, kita dapat mendeteksi protein spesifik di piring karena perkembangan warna.
Gambar 1: Jenis ELISA
ELISA Imunometrik/Sandwich
Sandwich ELISA juga merupakan proses dua langkah. Di sini, langkah pertama adalah mengapit protein yang bersangkutan dalam sampel antara antibodi primer dan sekunder. Maka dari itu, pada langkah pertama, pelat mikrotiter pertama-tama dilapisi dengan antibodi primer, tetapi tidak dengan sampel. Kedua, piring diinkubasi dengan sampel. Ketiga, antibodi sekunder terkait-enzim ditambahkan ke pelat. Antibodi sekunder ini berikatan dengan protein spesifik yang terikat pada antibodi primer. Akhirnya, perkembangan warna dapat mendeteksi kompleks antibodi yang terikat protein di piring.
Yang perlu anda ketahui tentang ELFA?
ELFA ( enzim-linked fluorescence assay ) adalah jenis lain dari immunoassays enzim fase padat, yang terlibat dalam pengembangan fluoresensi alih-alih warna seperti pada ELISA. Namun, prosedur eksperimental umum ELFA mirip dengan ELISA. Satu-satunya perbedaan dalam ELFA adalah penggunaan substrat kromogenik sebagai pengganti substrat kromogenik. Sebagai contoh, substrat kromogenik yang digunakan untuk enzim alkaline phosphatase dalam ELISA adalah p-nitrophenyl phosphate (PNPP). Namun, dalam ELFA, substrat fluorogenik yang digunakan untuk enzim alkaline phosphatase yang sama adalah 4-methylumbelliferyl phosphate (4MUP).
Lebih penting lagi, ELFA lebih sensitif daripada ELISA. Maka dari itu, dapat mendeteksi antibodi yang berkembang dalam waktu yang lebih singkat jika dibandingkan dengan waktu yang dibutuhkan oleh deteksi antibodi dengan ELISA.
Persamaan Antara ELISA dan ELFA
- ELISA dan ELFA adalah dua jenis tes imunologis yang membantu mendeteksi dan mengukur protein spesifik dalam sampel biologis.
- Desain dasar dari kedua percobaan adalah sama.
- Juga, keduanya adalah immunoassays enzim fase padat (EIA).
- Selain itu, mereka adalah metode throughput tinggi, sensitif tinggi, lebih cepat, dan dapat direproduksi.
Perbedaan ELISA dan ELFA
Definisi
ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) adalah istilah untuk teknik sensitif untuk mendeteksi dan mengukur antigen atau antibodi dalam larutan dengan menggunakan substrat kromogenik sedangkan ELFA (enzyme-linked fluorescence assay) adalah istilah untuk metode imunologi di mana enzim mengkatalisis fluoresensi , bukan reaksi warna. Jadi, inilah Perbedaan yang menonjol antara ELISA dan ELFA.
Metode Deteksi
Selain itu, ELISA mendeteksi perkembangan warna pada fase padat tetapi, ELFA mendeteksi perkembangan fluoresensi pada fase padat.
Substrat
Substrat yang digunakan dalam ELISA adalah chromogenic sedangkan substrat yang digunakan dalam ELFA adalah fluorogenic.
Kepekaan
Perbedaan lain antara ELISA dan ELFA adalah ELFA 100 kali lebih sensitif daripada ELISA.
Panjang Periode Jendela
Periode jendela lebih lama di ELISA sedangkan periode jendela sekitar lima hari lebih pendek dari ELISA di ELFA. Maka dari itu, ini adalah perbedaan lain antara ELISA dan ELFA.
Kata terakhir
ELISA adalah jenis uji imunologis yang mendeteksi protein dalam sampel biologis dengan pengikatan antibodi spesifik. Di sini, metode deteksi adalah pengembangan warna melalui reaksi enzimatik. Di sisi lain, ELFA adalah jenis lain dari immunoassay yang mendeteksi keberadaan protein tertentu dalam sampel dengan pengembangan fluoresensi melalui reaksi enzimatik. Maka dari itu, Perbedaan yang menonjol antara ELISA dan ELFA adalah jenis substrat dalam reaksi enzimatik.
Sumber bacaan:
- Shekarchi, IC et al. “Perbandingan uji imunosorben terkait-enzim dengan uji fluoresensi terkait-enzim dengan pembaca otomatis untuk mendeteksi antibodi virus rubella dan virus herpes simpleks” Jurnal mikrobiologi klinis vol. 21,1 (1985): 92-6. Tersedia disini
Sumber gambar:
- “ELISA” Oleh Jiver – Karya sendiri ( CC BY-SA 4.0 ) melalui Commons Wikimedia
