Perbedaan yang menonjol antara ELISA langsung dan tidak langsung adalah dalam ELISA langsung, antibodi primer secara langsung terkonjugasi dengan enzim pendeteksi sedangkan, dalam ELISA tidak langsung, antibodi sekunder yang melengkapi antibodi primer dikonjugasi dengan enzim pendeteksi. Ini berarti ELISA langsung menggunakan antibodi tunggal sedangkan ELISA tidak langsung menggunakan dua antibodi.
ELISA langsung dan tidak langsung adalah dua metode ELISA (enzyme-linked immunosorbant assay) yang digunakan untuk mendeteksi keberadaan antigen atau antibodi spesifik dalam medium.
Topik bahasan kami tentang:
- Apa itu ELISA Langsung – Pengertian, Prosedur, Karakteristik 2. Apa Itu ELISA Tidak Langsung – Pengertian, Prosedur, Karakteristik 3. Apa Persamaan Antara ELISA Langsung dan Tidak Langsung – Garis Besar Karakteristik Umum 4. Apa Perbedaan Antara Langsung dan Tidak Langsung ELISA – Perbandingan Perbedaan Kunci
Istilah Utama
ELISA Langsung, Enzim Deteksi, ELISA Tidak Langsung, Antibodi Primer, Antibodi Sekunder, Substrat
Yang perlu anda ketahui tentang ELISA Langsung?
ELISA langsung adalah metode ELISA yang memungkinkan deteksi antigen dengan antibodi primer terkait-enzim itu sendiri. Metode ELISA ini pertama kali dikembangkan Perlmann dan Engvall. Ini dianggap sebagai bentuk ELISA yang paling sederhana. Langkah-langkah ELISA langsung tercantum di bawah ini:
- Melapisi permukaan pelat dengan sampel;
- Inkubasi pelat dengan antibodi primer terkonjugasi enzim;
- Mencuci untuk menghilangkan antibodi yang tidak terikat dari piring;
- Penambahan substrat yang dibutuhkan oleh reaksi enzimatik;
- Deteksi sinyal yang dihasilkan dari pelat.
Di sini, dua jenis enzim utama yang terkonjugasi dengan antibodi primer adalah HRP (horseradish peroxidase) dan alkaline phosphatase. Tiga jenis substrat yang digunakan bersama dengan HRP adalah OPD (o-phenylenediamine dihydrochloride), TMB (3, 3′, 5, 5′-tetramethylbenzidine), dan ABTS (2, 2′-Azinobis [3-ethylbenzothiazoline-6- asam sulfonat]-garam diamonium). Substrat yang digunakan bersama dengan alkaline phosphatase adalah PNPP (p-Nitrophenyl Phosphate, Dinatrium Salt). Reaksi enzimatis pada substrat menyebabkan terjadinya perubahan warna pada media, yang bergantung pada jenis substrat dan enzim yang digunakan untuk reaksi tersebut. Ini memfasilitasi deteksi sampel dengan antigen target.
Gambar 1: ELISA langsung
ELISA langsung lebih cocok untuk mendeteksi jumlah antigen dengan berat molekul tinggi dalam sampel. Jumlah langkah yang lebih sedikit dalam metode ELISA ini membuatnya menjadi pengujian yang lebih cepat. Namun, karena biaya dan waktu yang digabungkan dengan pelabelan antibodi primer dengan enzim, penggunaan ELISA langsung cukup jarang. Di sisi lain, itu menghasilkan efek buruk pada antigen target juga.
Yang perlu anda ketahui tentang ELISA Tidak Langsung?
ELISA tidak langsung adalah metode lain dari ELISA yang menggunakan dua antibodi untuk deteksi: antibodi primer dan sekunder. Langkah-langkah ELISA tidak langsung adalah sebagai berikut:
- Melapisi permukaan pelat dengan sampel;
- Inkubasi pelat dengan antibodi primer;
- Mencuci untuk menghilangkan antibodi yang tidak terikat dari piring;
- Inkubasi pelat dengan antibodi sekunder terkonjugasi dengan enzim pendeteksi;
- Mencuci untuk menghilangkan antibodi yang tidak terikat dari piring;
- Penambahan substrat yang dibutuhkan oleh reaksi enzimatik;
- Deteksi sinyal yang dihasilkan dari pelat.
Gambar 2: ELISA Tidak Langsung
ELISA tidak langsung berlangsung melalui dua langkah pengikatan antibodi. Di sisi lain, antibodi sekunder terkonjugasi dengan enzim pendeteksi. Secara umum, ada banyak antibodi sekunder yang terkonjugasi dengan enzim. Di sini, antibodi sekunder terutama merupakan antibodi poliklonal, anti-spesies. Karena ketersediaan antibodi terkonjugasi enzim, metode ELISA tidak langsung lebih sering digunakan dalam uji imunologi dalam mendeteksi parasit, bakteri, dan virus. Di sisi lain, beberapa antibodi sekunder dapat terikat pada antibodi primer di piring. Maka dari itu, sensitivitas pengujian sangat tinggi.
Persamaan Antara ELISA Langsung dan Tidak Langsung
- ELISA langsung dan tidak langsung adalah dua metode ELISA di mana antigen yang diinginkan langsung menempel pada pelat.
- Kedua metode melibatkan deteksi keberadaan molekul protein tertentu dalam sampel. Molekul protein ini langsung menempel pada pelat.
- Pelat 96-sumur atau tabung strip 8-sumur digunakan dalam kedua metode. Kedua pelat dan tabung ini terbuat dari polistirena. Pelat 96-sumur menyediakan banyak ruang untuk penentuan pengenceran optimal untuk reaksi. Sementara itu, tabung strip 8-sumur lebih baik untuk pengujian yang disetel dengan baik.
Perbedaan Antara ELISA Langsung dan Tidak Langsung
Definisi
Elisa langsung adalah istilah untuk jenis ELISA di mana antibodi primer terkonjugasi dengan enzim pendeteksi sedangkan ELISA tidak langsung adalah istilah untuk jenis ELISA di mana antibodi sekunder terkonjugasi dengan enzim pendeteksi.
Jumlah Antibodi yang Digunakan
ELISA langsung menggunakan satu antibodi yaitu antibodi primer sedangkan ELISA tidak langsung menggunakan dua antibodi, yaitu antibodi primer dan antibodi sekunder. Inilah Perbedaan yang menonjol antara ELISA langsung dan tidak langsung.
Enzim Deteksi Terhubung ke
Selain itu, enzim pendeteksi terkait dengan antibodi primer dalam ELISA langsung sedangkan enzim pendeteksi terkait dengan antibodi sekunder dalam ELISA tidak langsung.
Intensitas Sinyal
Perbedaan lain antara ELISA langsung dan tidak langsung adalah sinyal yang dihasilkan oleh ELISA langsung kurang intensif sedangkan sinyal yang dihasilkan oleh ELISA tidak langsung lebih intensif karena penguatan sinyal.
Sinyal Latar Belakang
Namun, ELISA langsung menghasilkan lebih banyak sinyal latar belakang daripada ELISA tidak langsung.
Kepekaan
ELISA langsung kurang sensitif sedangkan ELISA tidak langsung lebih sensitif. Ini juga merupakan perbedaan antara ELISA langsung dan tidak langsung.
Reaktivitas Silang
Namun perbedaan lain antara ELISA langsung dan tidak langsung adalah reaktivitas silang. Artinya, reaktivitas silang minimum dalam ELISA langsung sementara signifikan dalam ELISA tidak langsung.
Waktu
Selanjutnya, ELISA langsung lebih sedikit memakan waktu karena langkah yang lebih sedikit sementara ELISA tidak langsung lebih memakan waktu karena langkah pengikatan antibodi berlipat ganda.
Frekuensi Penggunaan
Sementara ELISA langsung relatif jarang, ELISA tidak langsung lebih umum.
Kata terakhir
ELISA langsung hanya menggunakan antibodi primer untuk mendeteksi antigen tertentu. Ini berarti antibodi primer terkonjugasi dengan enzim pendeteksi dalam ELISA langsung. Tapi, ELISA tidak langsung menggunakan antibodi primer untuk mengikat antigen sedangkan antibodi sekunder terkonjugasi enzim mengikat antibodi primer. ELISA langsung kurang umum karena kurangnya ketersediaan antibodi primer terkonjugasi enzim. Perbedaan yang menonjol antara ELISA langsung dan tidak langsung adalah jumlah antibodi yang digunakan.
Sumber bacaan:
- “Jenis ELISA.” Bio-Rad , Laboratorium Bio-Rad, Tersedia Di Sini
Sumber gambar:
- “Diagram ELISA” Oleh Cavitri – Karya sendiri ( CC BY 3.0 ) melalui Commons Wikimedia 2. “ELISA Tidak Langsung” Oleh Cawang – Karya Sendiri (CC0) melalui Commons Wikimedia
