Cara Membedakan ELISA Tidak Langsung dan Sandwich?

Perbedaan yang menonjol antara ELISA tidak langsung dan sandwich adalah pada ELISA tidak langsung, pelat mikrotiter dilapisi dengan sampel dengan protein untuk dideteksi sedangkan pelat ini dilapisi dengan antibodi primer dalam ELISA sandwich . Selanjutnya, sandwich ELISA adalah metode sensitif 2-5 kali dari ELISA tidak langsung.

ELISA tidak langsung dan sandwich adalah dua metode ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) yang merupakan solid phase enzyme immunoassays (EIA). Mereka adalah metode yang relatif sensitif, yang juga lebih cepat dan dapat direproduksi.

Topik bahasan kami tentang:

1. Apa itu ELISA Tidak Langsung – Definisi, Prosedur, Pentingnya 2. Apa Itu Sandwich ELISA – Definisi, Prosedur, Kepentingan 3. Apa Persamaan Antara Tidak Langsung dan Sandwich ELISA – Garis Besar Karakteristik Umum 4. Apa Perbedaan Antara Tidak Langsung dan Sandwich ELISA – Perbandingan Perbedaan Kunci

Istilah Utama

ELISA, Antibodi Sekunder Terkait-Enzim, ELISA Tidak Langsung, Antibodi Primer, ELISA Sandwich, Sensitivitas

Yang perlu anda ketahui tentang ELISA Tidak Langsung?

ELISA tidak langsung adalah jenis ELISA dua langkah, yang menggunakan dua jenis antibodi untuk deteksi dan kuantifikasi protein tertentu dalam sampel. Prosedur ELISA tidak langsung adalah sebagai berikut.

• Melapisi permukaan pelat mikrotiter dengan sampel;
• Mencuci untuk menghilangkan protein yang tidak terikat dari piring;
• Inkubasi pelat mikrotiter berlapis protein dengan antibodi primer;
• Mencuci untuk menghilangkan antibodi yang tidak terikat dari piring;
• Inkubasi pelat mikrotiter dengan antibodi sekunder terkait-enzim;
• Mencuci untuk menghilangkan antibodi yang tidak terikat dari piring;
• Penambahan substrat kromogenik yang sesuai yang dibutuhkan oleh reaksi enzimatik;
• Deteksi sinyal yang dihasilkan dari pelat.

Gambar 1: ELISA Tidak Langsung

Secara umum, ELISA tidak langsung adalah metode yang baik untuk mendiagnosis infeksi bakteri, virus atau parasit dengan mengukur antibodi yang diproduksi oleh tubuh terhadap antigen patogen . Di sini, antibodi poliklonal dapat digunakan sebagai antibodi sekunder dalam ELISA tidak langsung. Maka dari itu, lebih hemat. Di sisi lain, berbagai jenis antibodi primer dalam jumlah yang berbeda dapat digunakan untuk mengikat protein target. Maka dari itu, ELISA tidak langsung adalah metode yang lebih fleksibel dan lebih sensitif untuk mendeteksi protein target.

Yang perlu anda ketahui tentang Sandwich ELISA

Sandwich ELISA adalah jenis lain dari ELISA dua langkah, yang menggunakan antibodi sekunder primer dan terkait-enzim untuk pendeteksiannya. Karakteristik utama dari sandwich ELISA adalah diapit oleh protein yang menarik di antara antibodi primer dan sekunder. Prosedur untuk sandwich ELISA adalah sebagai berikut:

• Melapisi permukaan pelat mikrotiter dengan antibodi primer;
• Mencuci untuk menghilangkan antibodi primer yang tidak terikat dari pelat;
• Inkubasi pelat mikrotiter dengan sampel;
• Mencuci untuk menghilangkan protein yang tidak terikat dari piring;
• Inkubasi pelat mikrotiter dengan antibodi sekunder terkait-enzim;
• Mencuci untuk menghilangkan antibodi sekunder yang tidak terikat dari pelat;
• Penambahan substrat kromogenik yang sesuai yang dibutuhkan oleh reaksi enzimatik;
• Deteksi sinyal yang dihasilkan dari pelat.

Gambar 2: Sandwich ELISA

Secara signifikan, sandwich ELISA baik untuk mendeteksi protein dengan berat molekul rendah hingga tinggi. Juga, lebih sensitif (2-5 kali) daripada ELISA langsung atau tidak langsung. Selain itu, sandwich ELISA merupakan teknik yang lebih spesifik karena menggunakan dua antibodi untuk menangkap protein target.

Persamaan Antara ELISA Tidak Langsung dan Sandwich

• ELISA tidak langsung dan sandwich adalah dua jenis metode ELISA yang membantu mendeteksi dan mengukur protein dalam sampel biologis.
• Kedua jenis metode ELISA ini terdiri dari metode dua langkah.
• Selain itu, mereka menggunakan antibodi primer dan antibodi sekunder terkait-enzim untuk mendeteksi protein spesifik termasuk antigen, antibodi, hormon, dll.
• Juga, karena keterlibatan dua jenis antibodi dalam dua jenis pengujian ini, spesifisitasnya tinggi.
• Selain itu, kedua metode tersebut merupakan metode throughput tinggi yang juga sangat sensitif. Mereka adalah tes yang lebih cepat dan dapat direproduksi.

Perbedaan Antara ELISA Tidak Langsung dan Sandwich

Definisi

ELISA tidak langsung adalah istilah untuk ELISA dua langkah yang melibatkan dua proses pengikatan antibodi primer dan antibodi sekunder berlabel sementara ELISA sandwich adalah istilah untuk jenis ELISA dua langkah lain di mana protein yang diinginkan diapit di antara antibodi primer dan sekunder. Jadi, inilah Perbedaan yang menonjol antara ELISA tidak langsung dan sandwich.

Melapisi Pelat Mikrotiter

Dalam ELISA tidak langsung, pelapisan pelat mikrotiter adalah sampel dengan protein sedangkan, pada ELISA sandwich, pelapisnya adalah antibodi primer.

Pengikatan Antibodi Sekunder

Antibodi sekunder mengikat antibodi primer dalam ELISA tidak langsung sedangkan antibodi sekunder mengikat protein yang diinginkan dalam ELISA sandwich.

Kepekaan

Perbedaan lain antara ELISA tidak langsung dan sandwich adalah ELISA tidak langsung adalah metode yang sensitif sedangkan ELISA sandwich 2-5 kali lebih sensitif daripada ELISA tidak langsung.

Aplikasi

Sementara ELISA tidak langsung lebih baik untuk menentukan konsentrasi antibodi total dalam sampel, ELISA sandwich lebih baik untuk analisis sampel kompleks. Maka dari itu, ini adalah perbedaan lain antara ELISA tidak langsung dan sandwich.

Kata terakhir

ELISA tidak langsung adalah jenis ELISA dua langkah yang terlibat dalam pengikatan antibodi primer ke protein yang diinginkan pada pelat mikrotiter diikuti dengan deteksi oleh antibodi sekunder terkait-enzim. Di sisi lain, sandwich ELISA adalah jenis lain dari ELISA dua langkah yang terlibat dalam pengikatan protein yang menarik ke antibodi primer, yang melapisi pelat mikrotiter diikuti dengan deteksi dengan antibodi sekunder terkait-enzim. Maka dari itu, Perbedaan yang menonjol antara ELISA tidak langsung dan sandwich adalah urutan prosedurnya.

Sumber bacaan:

1. “TechNote: Apa Perbedaan antara Jenis Pengujian ELISA?” Enzo Life Sciences , 27 Juli 2018, Tersedia Disini

Sumber gambar:

1. “ELISA Tidak Langsung” Oleh Cawang – Karya Sendiri (CC0) melalui Commons Wikimedia 2. “Sandwich ELISA” Oleh Cavitri, E_A_S, Tobias Vornholt – Versi modifikasi dari https://commons.wikimedia.org/wiki/File:ELISA_diretto_e_sandwich.png ( CC BY 3.0 ) melalui Commons Wikimedia