Perbedaan yang menonjol antara fase balik dan kromatografi interaksi hidrofobik adalah kromatografi fase terbalik (RPC) menggunakan media yang lebih hidrofobik , yang mengarah ke interaksi yang lebih kuat sedangkan kromatografi interaksi hidrofobik (HIC) menggunakan media yang kurang hidrofobik bila dibandingkan dengan media di kromatografi fase terbalik .
Kromatografi fase terbalik dan kromatografi interaksi hidrofobik adalah dua teknik kromatografi yang bergantung pada interaksi antara permukaan hidrofobik media kromatografi dan patch hidrofobik pada permukaan biomolekul.
Topik bahasan kami tentang:
- Apa itu Kromatografi Fase Terbalik – Pengertian, Langkah-langkah, Aplikasi 2. Apa Itu Kromatografi Interaksi Hidrofobik – Pengertian, Langkah-Langkah, Aplikasi 3. Apa Persamaan Antara Kromatografi Fase Balik dan Kromatografi Interaksi Hidrofobik – Garis Besar Karakteristik Umum 4. Apa Itu Perbedaan Antara Kromatografi Fase Terbalik dan Kromatografi Interaksi Hidrofobik – Perbandingan Perbedaan Utama
Istilah Utama
Kromatografi Interaksi Hidrofobik, HIC, Media, Kromatografi Fase Terbalik, RPC
Yang perlu anda ketahui tentang Kromatografi Fase Terbalik?
Kromatografi fase terbalik (RPC) adalah teknik kromatografi yang digunakan dalam pemurnian dan analisis biomolekul seperti protein , peptida , dan oligonukleotida. Ini memberikan pemisahan resolusi tinggi dan ideal untuk pemetaan peptida dan pemeriksaan kemurnian. RPC lebih sering digunakan dalam pemolesan akhir peptida dan oligonukleotida.
Dua jenis utama media hidrofobik dapat digunakan sebagai fase diam: manik-manik silika yang ditutupi dengan rantai karbon atau, polimer hidrofobik telanjang. Sebuah kolom dikemas dengan media hidrofobik dalam bentuk tempat tidur yang dikemas ke mana sampel diterapkan. Agen pasangan ion seperti asam trifluoroasetat (TFA) dapat ditambahkan ke fase gerak untuk meningkatkan pembentukan interaksi hidrofobik. Pengubah organik seperti 5% asetonitril digunakan pada awalnya dan elusi dapat dimulai dengan meningkatnya % asetonitril.
Gambar 1: Teori Kromatografi Fase Terbalik
Biomolekul yang kurang hidrofobik/lebih polar akan terelusi terlebih dahulu sedangkan molekul yang lebih hidrofobik akan terelusi kemudian. RPC adalah teknik kromatografi dengan resolusi tertinggi.
Yang perlu anda ketahui tentang Kromatografi Interaksi Hidrofobik?
Kromatografi interaksi hidrofobik (HIC) adalah teknik lain yang digunakan dalam pemisahan biomolekul berdasarkan hidrofobisitas dalam kondisi sedang. Ini adalah teknik yang ideal untuk pemurnian protein ketika sampel harus mengalami pengendapan amonium sulfat dalam konsentrasi sampel awal dan pembersihan. Tingkat garam yang meningkat selama presipitasi amonium sulfat meningkatkan interaksi antara komponen hidrofobik.
Gambar 2: Pengaruh Konsentrasi Garam Tinggi pada Interaksi Hidrofobik
Media hidrofobik HIC terdiri dari matriks inert partikel bola dilapisi dengan ligan yang mengandung gugus alkil atau aril. Interaksi hidrofobik terjadi di bawah konsentrasi garam yang cukup tinggi (biasanya 1–2 M amonium sulfat atau 3 M NaCl). Buffer awal memastikan pengikatan protein yang menarik ke media saat membersihkan kotoran. Buffer elusi mengandung konsentrasi garam yang rendah, melemahkan interaksi antara protein dan fase diam.
Persamaan Antara Kromatografi Fase Terbalik dan Kromatografi Interaksi Hidrofobik
- Kromatografi fase terbalik dan interaksi hidrofobik adalah dua teknik yang digunakan dalam pemisahan biomolekul berdasarkan hidrofobisitasnya.
- Fase gerak dari kedua teknik adalah air atau pelarut organik.
- Mereka menggunakan kolom tempat tidur yang dikemas.
- Start buffer memastikan pengikatan molekul yang diinginkan ke kolom.
- Molekul dengan hidrofobisitas terendah dapat terelusi terlebih dahulu sementara molekul yang lebih hidrofobik dapat terelusi kemudian.
- Langkah pencucian terakhir mengelusi molekul yang terikat paling rapat.
- Resolusi kedua teknik tersebut merupakan kombinasi dari selektivitas (derajat pemisahan antara puncak), efisiensi (kemampuan untuk menghasilkan puncak yang sempit dan simetris) dari teknik, massa sampel, dan waktu retensi.
Perbedaan Antara Kromatografi Fase Terbalik dan Kromatografi Interaksi Hidrofobik
Definisi
Kromatografi fase terbalik (RPC) adalah istilah untuk teknik pemisahan resolusi tertinggi berdasarkan hidrofobisitas molekul dalam campuran sedangkan kromatografi interaksi hidrofobik (HIC) adalah istilah untuk jenis teknik pemisahan berdasarkan hidrofobisitas tetapi, beroperasi dalam kondisi yang relatif ringan.
Hidrofobisitas
RPC beroperasi di bawah kondisi yang lebih hidrofobik sementara HIC beroperasi di bawah kondisi hidrofobik yang relatif ringan.
Interaksi
Kromatografi fase terbalik mengarah pada interaksi yang lebih kuat antara molekul dan fase diam yang harus dibalik selama elusi oleh pengubah organik sementara HIC mengarah pada interaksi yang cukup tinggi antara fase diam dan molekul.
Media Hidrofobik
RPC menggunakan manik-manik silika yang ditutupi dengan rantai karbon atau, polimer hidrofobik telanjang sementara HIC menggunakan matriks inert dari partikel bola yang dilapisi dengan ligan yang mengandung gugus alkil atau aril.
Mulai Penyangga
Buffer awal di RPC menggunakan asam trifluoroasetat (TFA) sedangkan buffer awal HIC menggunakan konsentrasi garam yang cukup tinggi.
Elusi
Peningkatan persentase asetonitril memulai elusi dalam RPC sedangkan penurunan konsentrasi garam memulai elusi dalam HIC.
Resolusi
Kromatografi fase terbalik adalah teknik kromatografi dengan resolusi tertinggi sedangkan resolusi HIC rendah jika dibandingkan dengan RPC.
Aplikasi
RPC digunakan dalam pemisahan protein, peptida, dan oligonukleotida sementara HIC terutama digunakan dalam pemurnian protein.
Kata terakhir
Kromatografi fase terbalik adalah teknik kromatografi dengan resolusi tertinggi, yang beroperasi di bawah kondisi yang sangat hidrofobik. Tapi, HIC beroperasi di bawah kondisi hidrofobik sedang. RPC dan HIC adalah dua jenis teknik pemisahan berdasarkan hidrofobisitas. Perbedaan yang menonjol antara RPC dan HIC adalah tingkat hidrofobisitas yang digunakan dalam setiap teknik.
Sumber bacaan:
- Interaksi Hidrofobik dan Kromatografi Fase Terbalik: Prinsip dan Metode . GE Healthcare, 2006. Tersedia Di Sini
Sumber gambar:
- “Skema Elusi Gradien Fase Terbalik” Oleh Nategm – Pekerjaan sendiri ( CC BY-SA 4.0 ) melalui Commons Wikimedia 2. “Hicsalt” Oleh Daliak di Wikibooks Bahasa Inggris – Ditransfer dari en.wikibooks ke Commons. ( Domain Publik ) melalui Commons Wikimedia
