Elektroforesis gel adalah teknik yang digunakan untuk memisahkan makromolekul seperti DNA, RNA , dan protein . Baik molekul DNA dan RNA dipisahkan berdasarkan ukurannya sementara protein dipisahkan berdasarkan ukuran dan muatannya. Elektroforesis gel agarosa adalah teknik yang digunakan untuk memisahkan DNA dan RNA. Dari 100 bp sampai 25 kb fragmen DNA dapat dipisahkan dengan elektroforesis gel agarosa. Umumnya, DNA adalah molekul bermuatan positif karena mereka memiliki muatan negatif dalam gugus fosfatnya . Dengan demikian, DNA bermigrasi menuju elektroda positif selama elektroforesis gel.
Topik bahasan kami tentang:
- Apa itu Elektroforesis Gel? – Pengertian, Elektroforesis Gel Agarosa, HALAMAN 2. Bagaimana Elektroforesis Gel Memisahkan Fragmen DNA – Prinsip Pemisahan DNA
Istilah Kunci: Elektroforesis Gel Agarosa, Jarak Migrasi, DNA, HALAMAN, Pori-pori, Elektroda Positif, Ukuran
Yang perlu anda ketahui tentang Elektroforesis Gel?
Elektroforesis gel adalah teknik yang digunakan untuk memisahkan fragmen makromolekul seperti DNA, RNA, dan protein berdasarkan ukuran dan muatannya. Baik DNA dan RNA memiliki muatan negatif yang sama di seluruh molekul karena adanya gugus fosfat bermuatan negatif. Maka dari itu, baik DNA dan RNA bermigrasi menuju elektroda positif di bawah medan listrik. Selain itu, elektroforesis gel agarosa merupakan teknik yang digunakan untuk memisahkan DNA dan RNA berdasarkan ukurannya. Pemisahan fragmen DNA dengan elektroforesis gel ditunjukkan pada Gambar 1 .
Gambar 1: Fragmen DNA Terpisah
Teknik elektroforesis gel yang digunakan untuk memisahkan protein adalah elektroforesis gel poliakrilamida (PAGE) . Protein yang digunakan dalam teknik ini dipisahkan berdasarkan ukuran dan muatannya. PAGE dapat digunakan untuk memisahkan fragmen DNA dengan perbedaan tingkat pasangan basa juga karena kekuatan pemisahan PAGE lebih tinggi daripada elektroforesis gel agarosa.
Bagaimana Elektroforesis Gel Memisahkan Fragmen DNA
Selama elektroforesis gel agarosa, sampel DNA dicampur dengan pewarna pemuatan dan dimuat pada sumur gel agarosa. Buffer pemuatan berisi pewarna pelacak yang memvisualisasikan pergerakan sampel DNA pada gel. Kemudian, medan listrik diterapkan pada kedua ujung gel. Sampel DNA bermigrasi menuju elektroda positif. Kecepatan migrasi pada medan listrik tergantung pada ukuran fragmen DNA. Molekul DNA dengan sejumlah besar pasangan basa bermigrasi secara lambat sementara molekul dengan pasangan basa yang lebih sedikit bermigrasi dengan cepat melalui gel. Maka dari itu, elektroforesis gel memungkinkan pemisahan fragmen DNA berdasarkan ukurannya. Ini menghasilkan serangkaian fragmen DNA dengan ukuran dalam urutan menurun. Hubungan antara jarak migrasi dan ukuran fragmen DNA ditunjukkan pada Gambar 2 .
Gambar 2: Hubungan Antara Jarak Migrasi dan Ukuran Fragmen DNA
Gel agarosa mengandung pori-pori berukuran sama di mana fragmen DNA bermigrasi. Maka dari itu, fragmen DNA kecil bermigrasi dengan cepat melalui pori-pori tetapi, fragmen DNA besar membutuhkan waktu untuk bermigrasi melalui mereka. Setelah menempuh jarak yang cukup jauh, gel agarosa divisualisasikan di bawah sinar UV. Karena gel agarosa ditambahkan dengan zat pewarna DNA di bawah UV yang disebut etidium bromida, fragmen DNA terjerat dengan pewarna, memungkinkan visualisasi. Untuk penentuan ukuran fragmen DNA, sampel dijalankan bersama dengan tangga yang berisi serangkaian fragmen DNA dengan ukuran yang diketahui.
Kata terakhir
Elektroforesis gel adalah teknik yang digunakan untuk memisahkan molekul DNA, RNA atau protein berdasarkan ukuran dan muatannya. Elektroforesis gel agarosa adalah teknik yang banyak digunakan untuk pemisahan DNA berdasarkan ukuran molekul. Selama migrasi molekul DNA melalui pori-pori gel agarosa, mereka dipisahkan berdasarkan ukurannya.
Sumber bacaan:
- “Elektroforesis gel.” Khan Academy , Tersedia di sini .
Sumber gambar:
- “DNA fragmendid etiidiumbromiidiga värvitud agaroosgeelis” Oleh Rainis Venta – Karya sendiri (CC BY-SA 3.0) melalui Commons Wikimedia 2. “Elektroforesis Gel” Oleh Mckenzielower – Karya sendiri (CC BY-SA 4.0) melalui Commons Wikimedia
