DNA rekombinan adalah jenis DNA buatan yang dihasilkan dengan menggabungkan DNA dari dua atau lebih spesies. Proses pembuatan DNA rekombinan dikenal sebagai kloning molekuler. Prosedur dasar kloning molekuler meliputi isolasi DNA, pemotongan DNA, penggabungan DNA, dan penguatan DNA rekombinan. Gen yang diinginkan dimasukkan ke dalam vektor , yang berfungsi sebagai molekul pembawa untuk gen yang diinginkan. Vektor, bersama dengan gen yang diinginkan, disebut DNA rekombinan. Peran utama enzim restriksi dalam kloning gen adalah memotong DNA. Karakteristik utama dari enzim restriksi yang membuatnya cocok untuk manipulasi DNA adalah mereka memotong DNA pada target tertentu. Hal ini memungkinkan produksi fragmen DNA yang diinginkan untuk tujuan penggabungan.
Topik bahasan kami tentang:
- Apa itu Enzim Pembatasan – Pengertian, Sifat, Peran 2. Bagaimana Enzim Pembatasan Digunakan untuk Membuat DNA Rekombinan – Kloning Gen, Penggunaan Enzim Pembatasan dalam Kloning Gen
Istilah Kunci: Pemotongan DNA, Kloning Gen, Gen yang Diinginkan, Kloning Molekuler, Teknologi DNA Rekombinan, Enzim Restriksi, Vektor
Yang perlu anda ketahui tentang Enzim Restriksi?
Enzim restriksi adalah endonuklease yang mengenali sekuens DNA pendek dan spesifik yang dikenal sebagai situs restriksi dan memotong DNA di situs tersebut. Mereka adalah jenis gunting biokimia yang diproduksi oleh bakteri. Enzim restriksi melindungi bakteri dari bakteriofag . Enzim ini diisolasi dari bakteri dan digunakan untuk memotong DNA di laboratorium. Kerja enzim restriksi ditunjukkan pada Gambar 1.
Gambar 1: Aksi HindIII
Kemampuan enzim restriksi untuk memotong DNA pada lokasi yang tepat memungkinkan peneliti untuk mengisolasi fragmen yang mengandung gen dari DNA genom . Fragmen ini dapat dimasukkan ke dalam vektor untuk menghasilkan molekul DNA rekombinan.
Bagaimana Enzim Pembatasan Digunakan untuk Membuat DNA Rekombinan?
DNA rekombinan adalah molekul DNA yang terdiri dari DNA dari dua atau lebih spesies. Ini terutama mencakup gen yang diinginkan dari spesies donor dan vektor yang membawa gen yang diinginkan ke sel inang. Langkah utama produksi molekul DNA rekombinan adalah isolasi DNA, pencernaan dengan enzim restriksi, ligasi gen yang diinginkan ke vektor, dan amplifikasi molekul DNA rekombinan di dalam sel inang. Seluruh proses ini dikenal sebagai kloning molekuler . Kloning molekuler ditunjukkan pada Gambar 2 .
Gambar 2: Kloning Molekul
Gen yang diinginkan pertama kali diisolasi dari sampel biologis dalam bentuk DNA genom , atau dapat diamplifikasi dengan PCR . Kadang-kadang, gen yang diinginkan mungkin ada di dalam vektor. Agar dapat dimasukkan ke dalam vektor yang cocok untuk membawa gen yang diinginkan ke dalam sel inang, ia harus dipotong dari molekul induknya. Karena enzim restriksi secara tepat memotong DNA dengan mengenali situs restriksi, mereka dapat digunakan untuk tujuan ini. Gen yang diinginkan dan vektor dapat dicerna dengan enzim restriksi yang sama, atau setiap ujung gen yang diinginkan dapat dicerna oleh dua enzim restriksi. Pencernaan ini menghasilkan ujung yang kompatibel untuk ligasi gen yang diinginkan ke vektor. Pencernaan dengan dua enzim restriksi memungkinkan ligasi fragmen dalam orientasi yang diinginkan. Setelah ligasi, molekul DNA rekombinan yang dihasilkan diubah menjadi bakteri untuk menghasilkan banyak salinan.
Kata terakhir
Enzim restriksi adalah endonuklease yang memotong DNA pada lokasi tertentu yang disebut situs restriksi. Sifat-sifat enzim restriksi dapat digunakan untuk menghasilkan molekul DNA rekombinan dengan memotong DNA pada lokasi yang tepat. DNA rekombinan umumnya mengandung gen yang diinginkan dimasukkan ke dalam vektor.
Sumber bacaan:
- “Definisi Enzim Restriksi.” MedicineNet, Tersedia di sini . 2. Griffiths, Anthony JF. “Membuat DNA rekombinan.” Pengantar Analisis Genetika. Edisi ke-7., Perpustakaan Kedokteran Nasional AS, 1 Januari 1970, Tersedia di sini .
Sumber gambar:
- “Situs Pembatasan HindIII dan vektor ujung lengket” Oleh Helixitta – Karya sendiri (CC BY-SA 4.0) melalui Commons Wikimedia 2. “Konstruksi” Oleh Joyxi – Karya sendiri (Domain Publik) melalui Commons Wikimedia
