Perbedaan yang menonjol antara membran nitroselulosa dan PVDF adalah membran nitroselulosa memiliki kapasitas pengikatan protein yang lebih tinggi sedangkan membran PVDF memiliki kapasitas pengikatan protein yang relatif rendah. Selanjutnya, molekul protein mengikat membran nitroselulosa melalui interaksi hidrofobik sementara molekul protein mengikat membran PVDF melalui interaksi hidrofobik dan interaksi dipol. Selain itu, membran nitroselulosa memiliki sensitivitas yang lebih tinggi dibandingkan dengan membran PVDF.
Membran nitroselulosa dan PVDF adalah dua jenis membran yang digunakan dalam western blot untuk mentransfer protein yang dipisahkan dengan elektroforesis gel . Secara umum, fungsi utama membran dalam blotting adalah sebagai perancah fisik, menahan fragmen protein.
Topik bahasan kami tentang:
- Apa itu Membran Nitroselulosa – Pengertian, Karakteristik, Kegunaan 2. Apa itu Membran PVDF – Pengertian, Karakteristik, Kepentingan 3. Apa Persamaan Antara Membran Nitroselulosa dan PVDF – Garis Besar Karakteristik Umum 4. Apa Perbedaan Antara Nitroselulosa dan PVDF Membran – Perbandingan Perbedaan Kunci
Istilah Utama
Membran Nitroselulosa, Kapasitas Pengikatan Protein, Membran PVDF, Sensitivitas, Western Blot
Yang perlu anda ketahui tentang Membran Nitroselulosa?
Membran nitroselulosa adalah salah satu jenis membran pertama yang digunakan untuk western blotting. Ini masih merupakan pilihan paling populer untuk teknik ini karena bersifat instan dan hampir tidak dapat diubah. Juga, membran nitroselulosa mudah terhidrasi. Namun, tidak cocok untuk pengupasan, reprobing atau perawatan kimia yang keras. Membran nitroselulosa yang didukung adalah salah satu pilihan yang ditetapkan karena struktur pendukung inertnya meningkatkan kekuatan dan ketahanan.
Gambar 1: Transfer Elektroforesis
Selanjutnya, pada western blotting, fragmen protein pada gel dipindahkan ke membran nitroselulosa dalam proses yang disebut transfer elektroforesis. Prinsip di balik proses ini adalah migrasi protein bermuatan negatif menuju anoda.
Yang perlu anda ketahui tentang Membran PVDF?
Membran PVDF adalah jenis membran lain yang digunakan dalam western blotting. Ini memiliki kapasitas pengikatan protein yang lebih tinggi jika dibandingkan dengan membran nitroselulosa. Dengan demikian, ini meningkatkan sensitivitas deteksi juga. Namun, peningkatan sensitivitas menghasilkan latar belakang yang lebih tinggi karena deteksi protein yang diekspresikan rendah.
Gambar 2: Membran Nitroselulosa
Selain itu, mengenai membran nitroselulosa, membran PVDF tidak harus dibasahi terlebih dahulu dengan metanol sebelum digunakan bersama dengan buffer transfer. Ini mencegah pengendapan protein dengan berat molekul tinggi dengan SDS rendah/larutan metanol tinggi. Sementara itu, keberadaan SDS dalam buffer transfer meningkatkan efisiensi blotting pada membran PVDF.
Persamaan Antara Membran Nitroselulosa dan PVDF
- Membran nitroselulosa dan PVDF adalah dua jenis membran yang digunakan dalam western blot.
- Mereka penting untuk pengikatan fragmen protein yang terpisah pada gel.
- Selain itu, proses transformasi terjadi dalam proses yang disebut transfer elektroforesis.
- Protein mengikat membran terutama melalui interaksi hidrofobik.
- Ukuran pori khas mereka adalah 0,1, 0,2 atau 0,45 m. Pada dasarnya, ukuran pori 0,1 dan 0,2 m penting untuk peptida kecil dan protein dengan berat molekul rendah kurang dari 15 kDa. Membran 0,45 m cocok untuk sebagian besar blotting protein. Di sisi lain, untuk kuantifikasi protein dan ketika dimuat dalam konsentrasi rendah, ukuran pori kecil lebih baik digunakan.
- Selanjutnya, membran pra-potong dan pra-pembasahan dalam metanol sangat ideal untuk kenyamanan, reproduktifitas dan aplikasi throughput yang tinggi.
- Keduanya memiliki kapasitas dan sensitivitas pengikatan protein yang sangat tinggi.
- Mereka juga mampu menolak latar belakang dan pengikatan non-spesifik.
- Selain itu, protein spesifik dapat dideteksi dengan metode chemiluminescence dan fluorescence.
Perbedaan Antara Membran Nitroselulosa dan PVDF
Definisi
Membran nitroselulosa adalah istilah untuk membran lengket yang digunakan untuk imobilisasi protein di western blot. Sementara itu, membran PVDF adalah istilah untuk jenis membran lain yang digunakan dalam western blot untuk transfer protein dengan daya ikat tinggi.
Karakter fisik
Membran nitroselulosa rapuh dan rapuh, sedangkan membran PVDF secara fisik tahan lama.
Tahan Kimia
Sementara membran nitroselulosa tidak tahan kimia, membran PVDF tahan kimia.
Pra-Basahi
Membran nitroselulosa harus dibasahi terlebih dahulu dengan metanol sedangkan membran PVDF tidak perlu dibasahi terlebih dahulu.
Kapasitas Pengikatan Protein
Selain itu, membran nitroselulosa memiliki kapasitas pengikatan protein yang relatif rendah (80-100 g/cm2) sedangkan membran PVDF memiliki kapasitas pengikatan protein yang tinggi (170-200 g/cm2).
Interaksi Protein
Protein mengikat membran nitroselulosa melalui interaksi hidrofobik sementara mereka mengikat membran PVDF melalui interaksi hidrofobik dan dipol.
SDS
Membran nitroselulosa tidak memerlukan SDS dalam buffer transfer, yang meningkatkan pengikatan protein dengan berat molekul rendah dan membantu mencegah transfer protein yang berlebihan melalui membran sementara SDS meningkatkan efisiensi blotting protein ke membran PVDF.
Penggunaan di Western Blotting
Sementara membran nitroselulosa digunakan untuk protein dengan berat molekul rendah, membran PVDF digunakan untuk protein dengan berat molekul tinggi.
Kepekaan
Selanjutnya, membran nitroselulosa memiliki sensitivitas yang relatif rendah sedangkan membran PVDF memiliki sensitivitas tinggi karena kapasitas pengikatannya yang lebih tinggi.
Latar belakang
Membran nitroselulosa menghasilkan latar belakang yang lebih rendah karena sensitivitasnya yang lebih rendah sedangkan membran PVDF memiliki latar belakang yang lebih tinggi karena sensitivitasnya yang lebih besar dalam mendeteksi protein dengan ekspresi yang lebih rendah.
Pengupasan dan Pengulangan
Selain itu, membran nitroselulosa sulit untuk dilucuti dan direprobe sedangkan membran PVDF mudah dikupas dan direprobe karena hidrofobisitasnya yang lebih tinggi.
Penggunaan lainnya
Membran nitroselulosa digunakan untuk analisis asam nukleat (<300 bp), analisis asam amino, dan dot/slot blotting sedangkan membran PVDF digunakan untuk pengurutan protein, analisis asam amino, dan sistem pengujian fase padat.
Kata terakhir
Membran nitroselulosa adalah jenis membran yang penting dalam western blot. Namun, ia memiliki kapasitas dan sensitivitas pengikatan protein yang relatif rendah. Ini juga menghasilkan latar belakang yang lebih rendah. Selain itu, ini terutama digunakan dalam pemisahan protein dengan berat molekul tinggi. Membran PVDF adalah jenis membran lain yang digunakan dalam western blot untuk pemisahan protein dengan berat molekul tinggi. Selain itu, membran ini memiliki kapasitas dan sensitivitas pengikatan protein yang relatif lebih tinggi. Namun, itu menghasilkan latar belakang yang lebih tinggi. Maka dari itu, Perbedaan yang menonjol antara membran nitroselulosa dan PVDF adalah kapasitas dan sensitivitas pengikatan proteinnya.
Sumber bacaan:
- Manusia Protein. “PVDF atau Nitroselulosa – Membran Mana yang Terbaik?” G-BIOSCIENCES , 12 November 2014, Tersedia Di Sini .
Sumber gambar:
- “Transfer Western blot” Oleh Bensaccount di Wikipedia bahasa Inggris ( CC BY 3.0 ) melalui Commons Wikimedia 2. “PonceauMembrane” Oleh Argymeg – Karya sendiri ( CC BY-SA 3.0 ) melalui Commons Wikimedia
