Proses pewarnaan diferensial digunakan dalam pewarnaan endospora . Malachite green adalah pewarna utama yang menodai sel vegetatif dan endospora dalam sampel. Kemudian, penggunaan panas membantu menembus noda primer ke endospora. Setelah dekolorisasi, safranin counterstain digunakan untuk mewarnai latar belakang.
Dua genera patogen yang dikenal sebagai Bacillus dan Clostridium menghasilkan endospora yang tidak aktif secara metabolik untuk melawan kondisi lingkungan yang merugikan. Karena endospora menyebabkan sejumlah penyakit mematikan, identifikasinya cukup penting dalam sampel klinis.
Topik bahasan kami tentang:
- Apa itu Endospora – Pengertian, Fakta 2. Apa Itu Pewarnaan Endospora – Teknik Pewarnaan Endospora 3. Mengapa Panas Digunakan Dalam Pewarnaan Endospora – Penggunaan Panas
Istilah Kunci: Endospora, Panas, Malachite Green, Pori-pori, Sel Vegetatif
Yang perlu anda ketahui tentang Endospora?
Endospora adalah struktur tahan yang dihasilkan oleh beberapa genera bakteri patogen seperti Bacillus dan Clostridium untuk bertahan hidup di bawah kondisi lingkungan yang tidak menguntungkan. Kondisi yang tidak menguntungkan ini dapat berupa panas, pengeringan, radiasi atau bahan kimia. Proses produksi endospora dari sel vegetatif disebut sporulasi. Mungkin diperlukan waktu 8-10 jam untuk menyelesaikan prosesnya. Endospora dapat berada di dalam sel bakteri atau mungkin ada sebagai spora bebas. Pembentukan endospora ditunjukkan pada Gambar 1.
Gambar 1: Formasi Endospora
Endospora secara metabolik tidak aktif atau tidak aktif. Mereka mengandung sejumlah kecil sitoplasma dan DNA yang ditutupi oleh lapisan luar pelindung. Dinding sel terdiri dari asam dipikolinat, memberikan sifat tahan panas pada endospora. Endospora berkecambah untuk menghasilkan organisme baru ketika kondisi lingkungan menjadi menguntungkan. Perlakuan panas lembab pada 121 °C selama 15 menit dapat menghancurkan endospora bakteri.
Yang perlu anda ketahui tentang Pewarnaan Endospora?
Pewarnaan endospora adalah proses pewarnaan diferensial di mana struktur yang berbeda dari spesimen diwarnai dengan warna yang berbeda. Ini memungkinkan identifikasi endospora dari sel vegetatif. Proses pewarnaan endospora standar adalah teknik Schaeffer-Dulton. Pewarna utama dalam teknik ini adalah malachite green, dan counterstainnya adalah safranin.
Teknik Schaeffer-Dulton – Prosedur
- Setelah dioleskan pada slide mikroskop, biarkan sampel bakteri jenuh dengan larutan hijau perunggu. 2. Kemudian, panaskan kaca objek secara perlahan selama 3-5 menit hingga pewarna mulai menguap.3. Biarkan slide menjadi dingin dan cuci dengan air untuk menghilangkan warna.4. Terakhir, setelah counterstaining, bilas slide.5. Keringkan slide dan amati di bawah mikroskop.
Di sini, endospora diwarnai dengan warna hijau dengan hijau perunggu dan sel vegetatif diwarnai dengan warna merah muda dengan safranin. Endospora yang diwarnai dengan teknik Schaeffer-Dulton ditunjukkan pada Gambar 2 .
Gambar 2: Endospora (hijau) dan Sel Vgetatif (merah muda)
Teknik alternatif pewarnaan endospora dapat diidentifikasi yang dikenal sebagai metode Doner. Endospora akan diwarnai dengan warna merah dalam metode ini.
Mengapa Panas Digunakan dalam Pewarnaan Endospora
Lapisan keratin endospora tahan terhadap pewarnaan. Maka dari itu, pewarna primer harus dipaksa masuk ke dalam endospora. Penggunaan panas adalah untuk meningkatkan penetrasi pewarna primer ke dalam endospora. Slide dengan perunggu hijau dapat dipanaskan hingga 3-5 menit. Waktu pemanasan berbanding lurus dengan jumlah zat warna yang menembus dinding endospora. Waktu pemanasan yang lebih lama membuat pori-pori pada dinding endospora, memudahkan penetrasi zat warna lebih banyak.
Kata terakhir
Endospora adalah sel reproduksi sebagian besar bakteri patogen. Maka dari itu, identifikasi endospora dalam sampel sangat penting dalam diagnostik.
Sumber bacaan:
- “Noda Endospora – Memahami Definisi, Teknik, dan Prosedur.” MicroscopeMaster , Tersedia di sini .
Sumber gambar:
- “Formasi Endospora” Oleh Farah, Sophia, Alex – Karya sendiri (CC BY-SA 4.0) melalui Commons Wikimedia 2. “Bacillus subtilis Spore” Oleh Y tambe (pengunggah asli) – Karya sendiri (CC BY-SA 3.0) melalui Wikimedia Commons
