Cara Membedakan Uji MTT dan MTS?

Perbedaan yang menonjol antara uji MTT dan MTS adalah uji MTT memiliki langkah tambahan yang terkait dengan pelarutan kristal formazan sedangkan uji MTS tidak terkait dengan pelarutan kristal formazan .

Uji MTT dan MTS adalah dua jenis uji yang digunakan untuk mengukur viabilitas sel secara in vitro . Mereka membantu mengungkap efek molekul uji pada proliferasi sel dan sitotoksisitas, yang memengaruhi viabilitas sel. Selanjutnya, uji MTT lebih memakan waktu daripada uji MTS.

Topik bahasan kami tentang:

1. Apa itu MTT Assay – Definisi, Proses, Pentingnya 2. Apa Itu MTS Assay – Definisi, Proses, Pentingnya 3. Apa Persamaan Antara MTT dan MTS Assay – Garis Besar Karakteristik Umum 4. Apa Perbedaan Antara MTT dan MTS Pengujian – Perbandingan Perbedaan Kunci

Istilah Utama

Proliferasi Sel, Viabilitas Sel, Sitotoksisitas, Uji MTS, Uji MTT

Yang perlu anda ketahui tentang Uji MTT?

Uji MTT adalah uji viabilitas sel homogen pertama yang dikembangkan untuk format 96-sumur yang cocok untuk penyaringan throughput tinggi (HTS). Prinsip pengujian ini adalah untuk menentukan viabilitas sel berdasarkan kemampuan sel untuk mereduksi pewarna tetrazolium dengan aksi enzim, oksidoreduktase seluler yang bergantung NAD(P)H , yang ada dalam sel yang hidup. Di sini, pewarna tetrazolium yang digunakan untuk uji MTT adalah 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, yang berwarna kuning. Tindakan enzimatik yang disebutkan di atas menghasilkan pembentukan produk formazan yang tidak larut dalam bentuk kristal yang diendapkan di dalam sel dan dekat permukaan sel dan dalam media kultur. Namun, karena kuantitas produk formazan diukur dengan cara mengukur absorbansi , kristal yang tidak larut harus dilarutkan terlebih dahulu dan kemudian absorbansi dapat diukur pada 570 nm.

Gambar 1: Reaksi MTT

Namun, meskipun uji MTT menggunakan lebih sedikit bahan dan langkah, ada beberapa kelemahan metode ini. Pengujian tidak cocok untuk menangguhkan sel. Selain itu, protein yang diendapkan dan puing-puing sel yang ada dalam sampel dapat mengganggu pengukuran absorbansi, mengurangi sensitivitas serta akurasi pengujian. Selain itu, waktu pengujian dan jumlah sel yang ada dalam sampel harus dioptimalkan untuk setiap jenis sel.

Yang perlu anda ketahui tentang Uji MTS?

Uji MTS adalah metode baru untuk uji MTT karena menggunakan jenis baru pewarna tetrazolium, yang pada akhirnya menghasilkan produk formazan yang larut dan berair. Di sini, pewarna tetrazolium yang digunakan dalam uji MTS adalah 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium. Pembentukan pewarna formazan terlarut terjadi dengan adanya phenazine methosulfate (PMS), yang berfungsi sebagai akseptor elektron perantara, mentransfer elektron dari NADH untuk mereduksi pewarna tetrazolium, membentuk produk formazan terlarut.

Gambar 2: Pelat MTT

Pembentukan langsung produk formazan terlarut mengurangi langkah pelarutan produk formazan dari uji MTT. Maka dari itu, uji MTS lebih efisien dan lebih sedikit memakan waktu. Juga, menghilangkan potensi kesalahan seperti kehilangan sel, yang dapat terjadi selama pemindahan media dan melarutkan produk formazan. Selain itu, produk formazan yang dihasilkan berwarna lebih gelap; ini meningkatkan sensitivitas dan akurasi pengujian.

Persamaan Antara MTT dan MTS Assay

• Uji MTT dan MTS adalah dua jenis pengujian yang menentukan viabilitas sel secara in vitro.
• Kedua tes membantu menilai efek molekul uji pada proliferasi sel dan sitotoksisitas.
• Juga, keduanya adalah tes kolorimetri.
• Selanjutnya, mereka menilai aktivitas metabolisme sel berdasarkan kemampuan sel untuk mereduksi pewarna tetrazolium menjadi formazan.
• Selain itu, enzim yang bertanggung jawab untuk reduksi di atas adalah oksidoreduktase seluler yang bergantung pada NAD(P)H, yang terdapat dalam sel yang hidup.
• Selain itu, reaksi reduksi terjadi di luar sel dengan transpor elektron membran plasma.
• Reagen MTT peka terhadap cahaya; karenanya, pengujian ini harus dilakukan dalam gelap.
• Selain itu, waktu inkubasi untuk kedua pengujian adalah sama setelah penambahan pewarna tetrazolium yaitu 1 sampai 4 jam pada suhu 37°C.

Perbedaan Antara Uji MTT dan MTS

Definisi

Uji MTT adalah istilah untuk uji kolorimetri untuk menilai aktivitas metabolisme sel sementara uji MTS adalah istilah untuk uji MTT ‘satu langkah’ yang menawarkan kemudahan menambahkan reagen langsung ke kultur sel tanpa langkah intermiten yang diperlukan dalam uji MTT. Jadi, ini adalah Perbedaan yang menonjol antara uji MTT dan MTS.

Jenis Pewarna Tetrazolium yang Digunakan dalam Pengujian

Selanjutnya, sementara uji MTT menggunakan MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide), uji MTS menggunakan MTS (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5 -(3-karboksimetoksifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazolium).

Kelarutan Produk Formazan

Juga, produk formazan dalam uji MTT tidak larut sedangkan produk formazan dalam uji MTS larut. Maka dari itu, ini adalah perbedaan penting antara uji MTT dan MTS.

Pengukuran Penyerapan

Selain itu, absorbansi diukur pada 570 nm dalam uji MTT sedangkan absorbansi diukur pada 490 nm.

Waktu

Waktu juga merupakan perbedaan antara uji MTT dan MTS. Uji MTS memakan waktu lebih sedikit daripada uji MTT.

Sensitivitas dan Akurasi

Selain itu, uji MTT kurang sensitif dan kurang akurat karena puing-puing sel dan protein yang diendapkan dapat mengganggu pengukuran absorbansi sedangkan uji MTS lebih sensitif dan akurat karena pembentukan produk formazan yang lebih gelap.

Biaya

Perbedaan lain antara uji MTT dan MTS adalah biayanya. Uji MTT lebih murah daripada uji MTS.

Kata terakhir

Uji MTT adalah uji klasik untuk mengukur viabilitas sel untuk menilai efek molekul uji pada proliferasi sel dan sitotoksisitas. Namun, produk formazan yang dihasilkan dalam uji MTT tidak larut; karenanya, pengujian ini memerlukan langkah tambahan untuk melarutkan produk formazan. Sebaliknya, uji MTS adalah metode baru untuk mengukur viabilitas sel dan menggunakan jenis baru garam tetrazolium, yang menghasilkan formazan larut, mengurangi satu langkah dalam prosedur uji MTT. Maka dari itu, uji MTS lebih efisien jika dibandingkan dengan uji MTT. Maka dari itu, Perbedaan yang menonjol antara uji MTT dan MTS adalah karakteristik produk formazan.

Sumber bacaan:

1. Riss TL, Moravec RA, Niles AL, dkk. Tes Viabilitas Sel. 2013 1 Mei [Diperbarui 1 Juli 2016]. Dalam: Sittampalam GS, Coussens NP, Brimacombe K, dkk., editor. Manual Panduan Pengujian [Internet]. Bethesda (MD): Eli Lilly & Company dan Pusat Nasional untuk Memajukan Ilmu Penerjemahan; 2004-. Tersedia Di Sini .

Sumber gambar:

1. “Reaksi MTT” Oleh Rogan Grant – Karya sendiri ( CC BY-SA 4.0 ) melalui Commons Wikimedia   2. “MTT Plate” Oleh Shinryuu – Karya sendiri (Domain Publik) melalui Commons Wikimedia