Perpustakaan genom adalah salah satu dari dua jenis perpustakaan DNA yang berisi total DNA kromosom dari organisme tertentu. Di dalam perpustakaan genom, sisipan DNA yang berbeda disimpan dalam populasi vektor yang identik . Untuk menyiapkan perpustakaan genom organisme tertentu, DNA genom harus diisolasi dari organisme. Enzim restriksi mencerna DNA genom pada urutan DNA tertentu, menghasilkan fragmen DNA genom. Setiap fragmen dapat berisi satu atau dua gen. Fragmen ini dimasukkan ke dalam jenis vektor tertentu dan diubah menjadi bakteri inang untuk menyiapkan klon DNA.
Topik bahasan kami tentang:
- Apa itu Perpustakaan Genom – Definisi, Fakta 2. Bagaimana Perpustakaan Genomik Diproduksi – Prosedur, Titer, Penyaringan
Istilah Kunci: Perpustakaan Genomik, Titer, Pembatasan Pencernaan, Penyaringan
Yang perlu anda ketahui tentang Perpustakaan Genom
Sebuah perpustakaan genom adalah satu set klon DNA yang mewakili seluruh isi DNA dari organisme tertentu. Klon DNA diperbanyak dengan replikasi pada mikroorganisme. Sebuah perpustakaan genom memungkinkan peneliti untuk mengisolasi fragmen DNA yang menarik dari perpustakaan untuk dipelajari. Pustaka genom penting dalam pengurutan seluruh genom.
Bagaimana Perpustakaan Genomic Diproduksi
Langkah-langkah yang terlibat dalam persiapan perpustakaan genom dijelaskan di bawah ini.
- Ekstraksi dan pemurnian DNA genom
- Pencernaan DNA genom dengan enzim restriksi tertentu – Ini dapat menghasilkan satu set fragmen DNA dengan ukuran yang sama. Setiap fragmen dapat berisi satu atau dua gen genom.
- Fragmen DNA dimasukkan ke dalam jenis vektor tertentu – Vektor dicerna dengan enzim restriksi yang sama diikuti dengan ligasi sisipan ke dalam vektor. Pemilihan vektor tergantung pada ukuran genom. Kapasitas vektor ditunjukkan di bawah ini.
Tabel 1: Kapasitas Vektor
|
Jenis Vektor |
Sisipkan Ukuran |
|
Plasmid |
10 kb |
|
Bakteriofag lambda |
20 kb |
|
kosmid |
45 kb |
|
Bakteriofag P1 |
70-100 kb |
|
Kromosom buatan P1 (PAC) |
130-150 kb |
|
Kromosom buatan bakteri (BAC) |
120-300 kb |
|
Kromosom buatan ragi (YAC) |
250-2000 kb |
- Transformasi menjadi inang – Inangnya adalah bakteri atau ragi di sebagian besar kasus. Sebuah klon dari fragmen DNA tertentu terbentuk selama replikasi inang.
Gambar 1: Persiapan Perpustakaan Genom
Penentuan Titer Perpustakaan
Titer perpustakaan memungkinkan peneliti untuk memahami berapa banyak sel inang yang berubah dalam sampel. Ini dilakukan dengan mengencerkan sel-sel yang diubah dan menghitung jumlah sel per volume.
Perpustakaan Pemutaran
Skrining memungkinkan isolasi fragmen DNA tertentu dari perpustakaan. Ini dapat dilakukan terutama dengan dua cara, baik dengan pemilihan langsung rekombinan atau deteksi ekspresi. Seleksi langsung dapat dilakukan dengan PCR dan hibridisasi koloni.
Kata terakhir
Perpustakaan genom adalah kumpulan fragmen DNA yang mewakili seluruh konten DNA dalam genom organisme tertentu. Ini diproduksi dengan memasukkan DNA genom yang terfragmentasi ke dalam vektor dan mengubah molekul rekombinan menjadi sel inang untuk multiplikasi.
Sumber bacaan:
- Kumar, Chinnu S. “Perpustakaan Genom.” LinkedIn SlideShare , 4 Okt. 2015, Tersedia di sini .
Sumber gambar:
- “Konstruksi Perpustakaan Genom” Oleh Aluquette – Karya sendiri (CC BY-SA 3.0) melalui Commons Wikimedia
