Teknologi DNA rekombinan adalah metode menggabungkan DNA dua spesies dan memasukkannya ke dalam organisme inang, untuk menghasilkan kombinasi genetik baru. Proses laboratorium yang digunakan untuk menghasilkan DNA rekombinan adalah kloning molekuler . PCR mereplikasi fragmen DNA yang diinginkan yang dimasukkan ke dalam plasmid . Plasmid rekombinasi diubah menjadi organisme inang untuk menghasilkan sejumlah besar salinan plasmid rekombinasi. Bakteri adalah organisme inang yang digunakan dalam teknologi DNA rekombinan dan ada beberapa alasan untuk menggunakannya sebagai inang.
Topik bahasan kami tentang:
- Apa itu Teknologi DNA Rekombinan – Pengertian, Tahapan Proses 2. Mengapa Bakteri Digunakan dalam Teknologi DNA Rekombinan – Alasan Penggunaan Bakteri sebagai Organisme Inang
Istilah Kunci: Bakteri, Kloning Molekul, Laju Pertumbuhan, Teknologi DNA Rekombinan, PCR, Plasmid, Seleksi
Yang perlu anda ketahui tentang Teknologi DNA Rekombinan?
Teknologi DNA rekombinan adalah teknik biologi molekuler yang digunakan untuk menghasilkan molekul DNA rekombinan yang membawa karakteristik yang diinginkan ke organisme tertentu. Kloning molekuler adalah teknik laboratorium yang digunakan untuk menghasilkan sejumlah besar salinan DNA rekombinan yang digabungkan dengan PCR. Proses kloning molekuler terdiri dari tujuh langkah seperti yang dijelaskan di bawah ini.
- Pilihan organisme inang dan vektor kloning – Organisme inang sebagian besar adalah bakteri. Pilihan vektor kloning tergantung pada pilihan organisme inang, ukuran fragmen DNA asing, dan tingkat ekspresi.
- Persiapan DNA vektor – Vektor kloning dicerna dengan enzim restriksi untuk membuat ujung yang kompatibel dengan fragmen DNA asing.
- Persiapan DNA yang akan diklon – Fragmen DNA yang diinginkan untuk dikloning dapat diamplifikasi oleh PCR dan dicerna dengan enzim restriksi untuk menghasilkan ujung yang kompatibel dengan vektor kloning.
- Penciptaan DNA rekombinan – Vektor kloning yang dicerna dan fragmen PCR diikat dengan perlakuan dengan DNA ligase.
- Pengenalan DNA rekombinan ke dalam organisme inang – Molekul DNA rekombinasi diubah menjadi bakteri untuk mendapatkan sejumlah besar salinan.
- Seleksi organisme yang ditransformasi – penanda yang dapat dipilih seperti resistensi antibiotik dapat digunakan untuk memilih bakteri yang ditransformasi dalam suatu kultur.
- Skrining untuk klon dengan DNA yang diinginkan – Sistem skrining biru-putih, PCR, analisis fragmen restriksi, hibridisasi asam nukleat, sekuensing DNA, dan probe antibodi dapat digunakan untuk menyaring klon dengan fragmen DNA yang diinginkan.
Langkah – langkah teknologi DNA rekombinan ditunjukkan pada gambar 1 .
Gambar 1: Teknologi DNA Rekombinan
Mengapa Bakteri Digunakan dalam Teknologi DNA Rekombinan
Bakteri menjadi ‘pabrik’ yang menghasilkan sejumlah besar salinan DNA rekombinan. Ada beberapa alasan penggunaan bakteri sebagai inang dalam teknologi DNA rekombinan. Mereka;
- Sel bakteri mudah tumbuh, dipelihara, dan dimanipulasi di laboratorium. Persyaratan pertumbuhan sederhana pada bakteri dan dapat diberikan dalam cawan petri. Kondisi pertumbuhan dapat disediakan dengan mudah di dalam inkubator. Mereka juga dapat mentolerir DNA asing di dalam sel.
- Mereka berkembang biak dengan cepat. Karena bakteri adalah organisme kecil, mereka tumbuh lebih cepat daripada jenis sel yang kompleks. Tingkat pembelahan sel mereka tinggi.
- Unsur-unsur ekstrakromosomal bakteri yang dikenal sebagai plasmid dapat dimanipulasi dan dapat digunakan sebagai pembawa DNA rekombinan ke dalam sel. Plasmid dapat diisolasi dari bakteri untuk memasukkan DNA asing dan kemudian diubah kembali menjadi bakteri.
- Kloning, plasmid rekombinan dapat dengan mudah diisolasi dari bakteri. DNA plasmid dapat diisolasi dengan proses laboratorium yang mudah melalui lisis sel bakteri.
Penggunaan bakteri dalam teknologi DNA rekombinan ditunjukkan pada gambar 2.
Gambar 2: Penggunaan Bakteri dalam Teknologi DNA Rekombinan
- coli adalah jenis bakteri yang banyak digunakan karena beberapa alasan:
- E. coli dipelajari dengan baik dan relatif sederhana. Ia hanya membawa 4.400 gen. Selanjutnya, ia tetap haploid sepanjang hidup. Maka dari itu, rekayasa protein mudah dilakukan dengan E. coli sebagai salinan gen tunggal yang akan ditutupi oleh mutagenesis terarah-situs.
- Laju pertumbuhan E . koli tinggi. Ini mereplikasi dengan cepat dalam waktu 20 menit. Maka dari itu, mudah untuk mendapatkan fase log (pertengahan jalan hingga kepadatan maksimum).
- Banyak strain E. coli aman untuk ditangani dengan kebersihan yang wajar.
- Persiapan sel kompeten (sel yang mampu menyerap DNA asing) dan transformasi molekul rekombinan mudah dilakukan dengan E. coli .
Kata terakhir
Teknologi DNA rekombinan digunakan untuk memperkenalkan karakteristik yang diinginkan pada organisme. Bakteri digunakan sebagai model dalam teknologi DNA rekombinan karena berbagai alasan seperti pertumbuhan dan manipulasi yang mudah, pembelahan sel yang cepat, kesederhanaan, kemampuan untuk memilih dan menyaring transforman.
Sumber bacaan:
- Griffiths, Anthony JF. “Membuat DNA rekombinan.” Pengantar Analisis Genetika. Edisi ke-7., Perpustakaan Kedokteran Nasional AS, 1 Januari 1970, Tersedia di sini . 2. Philips, Theresa. “6 Alasan Teratas E. coli Digunakan untuk Kloning Gen.” Saldo, Tersedia di sini .
Sumber gambar:
- “OSC Microbio 12 01 MolCloning” Oleh CNX OpenStax – (CC BY 4.0) melalui Commons Wikimedia 2. “Kloning gen” Oleh Kelvinsong – Karya sendiri (CC BY-SA 3.0) melalui Commons Wikimedia
