Pewarnaan Gram adalah teknik cepat yang memungkinkan untuk membedakan bakteri menjadi Gram positif atau Gram negatif, berguna untuk membantu dokter menyesuaikan pengobatan beberapa jenis infeksi.
Teknik ini biasanya dilakukan secara rutin di laboratorium dan merupakan bagian dari pemeriksaan bakterioskopi. Selain pewarnaan bakteri, pewarnaan Gram juga memungkinkan pengamatan bentuk bakteri dan karakteristik dinding selnya.
Pada hasil pewarnaan Gram, bakteri Gram positif teridentifikasi dengan warna biru, sedangkan bakteri Gram negatif memiliki noda berwarna merah muda atau keunguan.
diamati di bawah mikroskop
untuk apa ini
Pewarnaan Gram berfungsi untuk mengklasifikasikan bakteri menjadi:
- Bakteri gram positif : mereka divisualisasikan dengan warna biru karena tidak berubah warna oleh alkohol, karena mereka memiliki dinding sel yang lebih tebal dan pori-porinya mengecil saat terkena lugol;
- Bakteri gram negatif : divisualisasikan dengan warna pink/ungu karena berubah warna oleh alkohol dan diwarnai oleh safranin atau fuchsin.
Hasil dari teknik ini memungkinkan dokter untuk menunjukkan pengobatan awal untuk infeksi yang sedang berlangsung, karena karakteristik khusus dari kelompok bakteri ini diketahui. Perawatan awal ini memperlambat kecepatan bakteri berkembang biak dan mencegah timbulnya infeksi yang lebih serius.
Setelah pengecatan Gram, kemungkinan dilakukan pemeriksaan laboratorium lain untuk mengidentifikasi spesies bakteri. Identifikasi ini membutuhkan waktu lebih lama, tetapi membantu dokter untuk menyesuaikan antibiotik dengan lebih baik setelah pengobatan awal.
Pewarnaan gram langkah demi langkah
Langkah-langkah pewarnaan Gram adalah sebagai berikut:
- Tempatkan beberapa koloni bakteri pada slide mikroskop , tambahkan setetes air untuk memfasilitasi homogenisasi koloni;
- Biarkan sedikit mengering , dan Anda dapat dengan cepat melewatkan bilah melalui api untuk mendukung pengeringan. Namun, penting untuk memperhatikan suhu, karena jika suhu terlalu tinggi, kemungkinan terjadi perubahan struktur bakteri yang dapat mengganggu hasil tes;
- Lapisi dengan pewarna kristal violet dan biarkan bekerja selama sekitar 1 menit, saat slide sudah kering;
- Cuci slide di bawah air mengalir dan tutupi slide dengan lugol , yang bertujuan untuk memperbaiki pewarna biru, dan biarkan selama 1 menit.
- Cuci slide lagi dengan air mengalir dan oleskan alkohol 95% , biarkan bekerja selama 30 detik. Alkohol bertanggung jawab untuk melarutkan membran lipid yang membentuk bakteri gram negatif dan, dengan demikian, menghilangkan kompleks yang terbentuk antara pewarna dan lugol, mengubah warna bakteri ini.
- Cuci slide sekali lagi dengan air mengalir dan tutupi dengan pewarna kedua , fuchsin atau safranin, dan biarkan bekerja selama 30 detik;
- Cuci slide di bawah air mengalir dan biarkan kering pada suhu kamar.
- Letakkan setetes minyak imersi dan amati kaca objek di bawah mikroskop dengan lensa objektif 100x , segera setelah kaca objek kering. Di bawah mikroskop dimungkinkan untuk memverifikasi ada atau tidak adanya bakteri, serta keberadaan ragi dan sel epitel.
Penting untuk ditekankan bahwa protokol teknik Gram dapat bervariasi dari satu laboratorium ke laboratorium lainnya, karena mungkin terdapat variasi dalam reagen/pewarna yang digunakan dan konsentrasi.