Efisiensi transfeksi dapat dihitung dengan menghitung jumlah sel yang ditransfeksi ke total sel dalam sampel tertentu. Jumlah sel dapat dihitung dengan dua metode. Metode yang paling sering digunakan adalah dengan menggunakan reporter yang mudah dilacak. Reporter ini bisa berupa protein fluoresensi hijau (GFP), luciferase, beta-galactosidase, secreted alkaline phosphatase (SEAP). Metode terbaru untuk menghitung efisiensi transfeksi adalah dengan memberi label asam nukleat, memungkinkan pelacakan pengiriman intraseluler mereka. Beberapa pendekatan lain seperti Western blotting, immunostaining, dan uji fungsional juga dapat digunakan untuk menghitung efisiensi transfeksi. Karena efisiensi transfeksi bergantung pada beberapa parameter eksperimental, penentuan efisiensi transfeksi adalah kunci untuk menentukan pengaruh berbagai faktor pada transfeksi.
Topik bahasan kami tentang:
- Metode Apa yang Digunakan untuk Menghitung Efisiensi Transfeksi – Sistem Reporter 2. Cara Menghitung Efisiensi Transfeksi – Penghitungan Sel
Istilah Kunci: Flow Cytometry, GFP, Pelabelan Asam Nukleat, Sistem Reporter, Efisiensi Transfeksi
Apa Metode yang Digunakan untuk Menghitung Efisiensi Transfeksi
Berbagai jenis metode digunakan untuk menghitung efisiensi transfeksi.
- Sistem Reporter
– Protein fluoresensi hijau (GFP) – GFP secara alami ditemukan dalam ubur-ubur. Ini digunakan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif sel yang ditransfeksi dengan transfeksi simultan gen GFP dengan gen yang diinginkan. Analisis kualitatif dapat dilakukan di bawah mikroskop fluoresensi. Analisis kuantitatif dapat dilakukan dengan flow cytometry. Selain GFP, protein fluoresensi merah (RFP), dan protein fluoresensi kuning (YFP) juga dapat digunakan sebagai reporter. Koloni E. coli yang mengekspresikan protein fluoresen ditunjukkan pada Gambar 1 .
Gambar 1: Protein Fluoresens
- Luciferase – Luciferase secara alami ditemukan pada kunang-kunang, menghasilkan cahaya. Tes Luciferase sangat sensitif dan dapat digunakan untuk analisis kuantitatif DNA yang ditransfusikan.
- Beta-galaktosidase – Beta-galaktosidase ditemukan di E. coli . Ini digunakan dalam analisis kualitatif yang dilakukan dengan X-gal dan analisis kuantitatif dilakukan dengan metode kolorimetri, fluoresen atau chemiluminescent.
- Disekresikan alkaline phosphatase (SEAP) – SEAP adalah reporter stabil panas, yang dikeluarkan dari sel mamalia saat diekspresikan.
- Pelabelan Asam Nukleat – Plasmid berlabel fluoresen dapat digunakan dalam transfeksi. Kemudian mereka dapat dihitung di bawah mikroskop fluoresensi.
- Western blotting, immunostaining, dan tes fungsional lainnya
Cara Menghitung Efisiensi Transfeksi
Jumlah sel yang menunjukkan reporter dan jumlah sel yang tidak menunjukkan reporter dapat dihitung di bawah mikroskop atau dengan flow cytometry. Persentase sel yang menunjukkan reporter memberikan efisiensi transfeksi.
Gambar 2: Efisiensi Transfeksi
Kata terakhir
Efisiensi transfeksi dapat dihitung dengan menentukan jumlah sel yang menunjukkan DNA yang ditransfeksi di atas jumlah total sel dalam sampel. Jumlah sel dapat dihitung di bawah mikroskop atau dengan flow cytometry menggunakan sistem reporter.
Sumber bacaan:
- “Ukur Efisiensi Transfeksi.” Mirus Bio LLC , Tersedia di sini .
Sumber gambar:
- “E. coli mengekspresikan protein fluoresen ”Oleh Erin Rod – Karya sendiri, (CC BY-SA 4.0) melalui Commons Wikimedia
