Reaksi presipitasi adalah uji yang terlibat dalam serologi, untuk mendeteksi antigen dan antibodi. Ini adalah reaksi, di mana reaktan terlarut, yaitu antigen dan antibodi dikonversi menjadi bentuk agregat. Sensitivitas reaksi presipitasi relatif lebih rendah daripada reaksi immunoassay lainnya.
Untuk reaksi presipitasi, digunakan antibodi dan antigen poliklonal atau multivalen karena jika tidak, pembentukan kisi tidak akan terjadi. Untuk penampakan cincin atau pita presipitin, reaksi dapat memakan waktu beberapa jam hingga berhari-hari.
Tes presipitasi digunakan untuk mengukur antigen dan antibodi, dan karenanya spesifisitasnya juga tergantung pada konsentrasi kedua reaktan tersebut. Jika konsentrasi siapa pun baik antigen atau antibodi berlebihan, Immunocomplex tidak akan terbentuk.
Jadi, agar reaksi terjadi, konsentrasi antigen dan antibodi harus sama karena akibatnya terbentuk endapan atau kisi. Endapan yang merupakan produk akhir dari reaksi presipitasi dapat diukur dengan perangkat hamburan cahaya seperti turbidometer, nephelometer dll.
Pengertian Reaksi presipitasi
Reaksi presipitasi adalah didefinisikan sebagai uji immuno-serologis di mana kedua reaktan, yaitu antigen dan antibodi berdifusi baik dalam satu dimensi atau dua dimensi dalam media cair atau semi-padat. Antigen dan antibodi bereaksi satu sama lain untuk membentuk “Immunocomplex” atau “Lattice” pada zona kesetaraan di mana konsentrasi keduanya sama.
Kisi yang dibentuk oleh antigen dan antibodi terlihat, baik dalam bentuk cincin precipitin atau dalam cara garis precipitin. Precipitin adalah antibodi yang bereaksi dengan antigen masing-masing untuk membentuk “Endapan”.
Istilah Penting
Ada istilah khusus, yang harus kita ketahui sebelum beralih ke teori reaksi presipitasi.
- Presipitin: Ini dapat didefinisikan sebagai antibodi terlarut yang bereaksi dengan antigen terlarut untuk membentuk produk akhir yang dikenal sebagai “Endapan”.
- Presipitinogen: Ini dapat didefinisikan sebagai antigen terlarut yang menginduksi pembentukan precipitin, yaitu antibodi terlarut.
- Lattice: Ini dapat didefinisikan sebagai struktur ikatan silang yang dibentuk oleh ikatan silang antigen dan antibodi untuk membentuk “Immunocomplex”.
Prinsip Reaksi presipitasi
Reaksi presipitasi didasarkan pada prinsip “Reaksi Antigen-Antibodi”, yang terjadi pada zona kesetaraan. Pada daerah ekivalensi, rasio atau konsentrasi antigen dan antibodi adalah sama yang menghasilkan pembentukan kisi atau struktur yang saling terkait.
Di zona ekivalensi, terjadi cross-linkage yang menghasilkan pembentukan kompleks antigen-antibodi sebagai cincin atau garis endapan yang terlihat. Antigen dan antibodi yang paling larut akan membentuk kompleks pada titik ekivalensi sedangkan antigen dan antibodi bebas akan tetap sebagai “Supernatan”.
Metode Reaksi presipitasi
Berdasarkan jenis matriks, metode reaksi presipitasi meliputi:
Pengendapan dalam Larutan
Dalam tipe ini, metode presipitasi dilakukan dalam media atau larutan cair. Ini terdiri dari dua metode yaitu cincin dan uji flokulasi.
Tes cincin
Dalam tes cincin, antibodi yang ada dalam serum pertama kali diambil dalam tabung reaksi. Setelah itu, tes antigen ditambahkan ke larutan. Kemudian, setelah inkubasi reaktan, reaksi presipitasi terjadi antara antigen dan antibodi dan bentuk endapan putih di persimpangan.
Tes flokulasi
Tes ini dapat dilakukan dengan salah satu dari dua cara berikut:
Tes flokulasi slide: Dalam tes slide pertama, setetes antiserum ditambahkan ke slide kaca bersih. Kemudian di atas antiserum, setetes antigen uji ditambahkan diikuti dengan pencampuran menyeluruh. Jika penggumpalan antara antigen dan antibodi terjadi, tes slide akan memberikan hasil yang positif dan sebaliknya.
Uji flokulasi tabung: Dalam hal ini, prosedurnya sama dengan uji flokulasi slide, tetapi satu-satunya perbedaan adalah dilakukan dalam tabung reaksi alih-alih slide.
uji flokulasi tabung
Contoh tes flokulasi tabung adalah tes RPR (Rapid Plasma Reagin) dan VDRL (Venereal Disease Research Laboratory).
Presipitasi di Agar
Dalam jenis ini, metode presipitasi dilakukan di media biasa seperti media agar nutrien. Dalam media agar, reaksi antigen dan antibodi terjadi dengan dua cara:
Dengan immunodiffusion
Dalam metode ini, difusi terjadi melalui media agar intervensi yang laju dipengaruhi atau dipengaruhi oleh faktor-faktor berikut seperti:
- Ukuran partikel reaktan
- Suhu
- Viskositas gel
- Interaksi antara matriks gel dan reaktan
Konsentrasi agar yang disukai adalah antara 0,3-1,5 persen untuk difusi reaktan yang efektif untuk pembentukan kisi. Dalam agar-agar, difusi terjadi dengan dua cara:
- Difusi tunggal
- Difusi ganda
Difusi tunggal dan ganda dapat terjadi baik dalam satu dimensi dan dimensi ganda. Difusi satu dimensi melibatkan difusi antigen atau antibodi pada gel agar. Difusi dimensi ganda terdiri dari difusi antigen dan antibodi pada media agar padat.
- Reaksi presipitasi dengan imunodifusi meliputi empat metode yaitu:
- Metode imunodifusi Oudin
Ini adalah jenis metode imunodifusi tunggal, yang terjadi dalam satu dimensi.
Tes imunodifusi Oudin
Dalam immunodiffusion Oudin pertama, tambahkan antibodi dalam media agar cair dan tuangkan ke dalam cawan petri. Setelah pembekuan matriks gel, tambahkan lapisan antigen terlarut. Akibatnya, antibodi yang dimasukkan dalam matriks gel tidak akan berdifusi, tetapi terjadi difusi antigen. Antigen akan berdifusi ke arah antibodi dan membentuk garis endapan.
Metode imunodifusi Oakley Fulthorpe
Ini adalah jenis metode imunodifusi ganda, yang terjadi dalam satu dimensi.
Tes imunodifusi Oakley
Dalam immunodiffusion Oakley Fulthorpe pertama, tambahkan antibodi dalam media agar cair. Di atas lapisan antibodi yang dimasukkan media agar-agar, tambahkan satu lapisan media agar-agar polos. Kemudian di atas media agar biasa, tambahkan lapisan antigen terlarut. Pada inkubasi, antigen dan antibodi akan bergerak ke arah satu sama lain untuk membentuk garis precipitin.
Imunodifusi Radial
Ini adalah jenis metode difusi tunggal yang terjadi dalam dua arah.
Dalam Imunodifusi Radial pertama, antibodi yang ada dalam serum ditambahkan dalam media agar cair dan dituangkan ke dalam slide kaca. Setelah pemadatan gel, matriks menciptakan sumur dan menambahkan tes antigen ke dalamnya.
Setelah inkubasi, antibodi yang tergabung dalam gel agar akan bereaksi dengan antigen spesifik. Difusi radial terjadi di luar permukaan sumur, disebut sebagai “cincin Precipitin”. Diameter cincin precipitin berbanding lurus dengan konsentrasi antigen.
Metode Imunodifusi Ouchterlony
Ini adalah jenis imunodifusi ganda, yang terjadi pada dua dimensi. Dalam Ouchterlony Immunodiffusion pertama, tambahkan serum ke dalam agar gel dan setelah pemadatan membuat sumur. Antigen kemudian ditambahkan ke dalam sumur. Metode ini digunakan untuk perbandingan antigen ketika mereka identik, tidak identik dan sebagian identik.
Ketika antigen identik, mereka akan berbagi penentu antigenik yang sama.
Misalkan Antigen-‘A ’adalah dua jenis yang identik, sehingga mereka akan memiliki epitop yang sama misalkan‘ a ’. Oleh karena itu antigen akan bereaksi dengan antibodi yang tergabung dalam agar-agar dan membentuk “garis precipitin berbentuk busur” yang akan merujuk sebagai pola identitas.
Ketika antigen tidak identik, mereka tidak akan berbagi epitop yang sama.
Misalkan ada dua antigen – ‘A’ dan ‘B’ dan epitop ‘a’ dan ‘b’ masing-masing. Oleh karena itu antigen akan bereaksi dengan antibodi dan membentuk garis precipitin yang saling tumpang tindih yang akan merujuk sebagai pola non-identitas.
Ketika antigen sebagian identik, mereka akan berbagi satu atau lebih epitop.
Misalkan ada dua antigen – ‘A’ dan ‘X’ dan epitop ‘kapak’ dan ‘bx’ masing-masing. Oleh karena itu reaksi silang akan terjadi antara antigen dan antibodi, akibatnya akan terbentuk garis precipitin yang tidak lengkap yang akan merujuk pada pola identitas parsial.
Dengan immunoelectrophoresis
Jenis metode presipitasi melibatkan difusi (Baik dalam satu atau dua arah) ditambah teknik elektroforesis.
Immunoelectrophoresis mencakup dua metode berikut yang diberikan di bawah ini:
Immunoelectrophoresis roket
Metode ini dilakukan pada slide kaca yang terjadi dalam satu dimensi.
ROCKET IMMUNOELECTROPHORESIS
Dalam Rocket immunoelectrophoresis, agar-agar dituang yang dihomogenisasi dengan antiserum. Kemudian sebuah sumur dibuat di mana antigen ditambahkan. Setelah elektroforesis, antigen yang bermuatan negatif akan bermigrasi ke arah antibodi yang bermuatan positif.
Migrasi antigen ini pada interaksi dengan antibodi akan membentuk sebuah kompleks muncul sebagai garis precipitin yang terlihat dalam bentuk roket. Ketinggian pergerakan roket berbanding lurus dengan jumlah antigen yang dimuat ke dalam sumur.
Counter-immunoelectrophoresis
Ini adalah metode immunoelectrophoresis di mana difusi terjadi dalam dua dimensi.
Dalam Counter immunoelectrophoresis, tuangkan gel agar ke kaca slide. Kemudian buat sumur di kedua tepi kaca slide. Di satu sisi, tambahkan antigen dan di sisi lain tambahkan antiserum.
Setelah elektroforesis, antigen akan bermigrasi ke arah anoda, dan antibodi akan bermigrasi ke arah katoda. Pada interaksi antara antigen dan antibodi, garis precipitin akan terbentuk.